苯酚硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量
作者：钟世红，卫莹芳，古锐，黄小雪，谢武超，杨湘。
【摘要】 目的建立红毛五加皮多糖的含量测定方法，对不同产地样品进行测定。方法采用苯酚—硫酸比色法。结果葡萄糖的线性范围为24.05～54.11 μg /ml，平均加样回收率为97.80 %，RSD为1.59%（n=6）。红毛五加皮的多糖含量为6.83%～24.50%；木心的多糖含量为5.78%～9.21% 。结论该方法快速、准确，可为红毛五加药材的质量控制提供 参考 。建议红毛五加皮多糖含量不得低于10.9%，木心具有一定利用价值。
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Abstract：ObjectiveTo determine the content of polysaccharides in cortex acanthopanacis giraldii from different regions.MethodsPhenol—sulfuric acid colorimetry was used to determine the content of polysaccharides. ResultsThe linear range of glucose was 24.05～54.11 μg / ml. The average recovery was 97.80%,and RSD was 1.59%（n=6）. The polysaccharides content of bark was within the range of 6.83%～24.50% and that of xylem was within the range of 5.78%～9.21%.ConclusionThe method is rapid,accurate and can be used for the quantity control of A. Giraldii Harms. The polysaccharides content of bark should not be lower than 10.9%. The xylem is valuable in some degree.
Key words： Cortex acanthopanacis giraldii; Polysaccharides; Phenol—sulfuric acid colorimetry。
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红毛五加皮为四川地区的习用药材和岷江上游羌民族特色药材，收载于《四川省中药材标准》1987年版，具有祛风湿、强筋骨、利关节之功效。作为红毛五加中的一类主要有效成分，红毛五加多糖（AGP）已被广泛证实具有提高免疫［1］、抗肿瘤［2］、抗病毒［3］等药理活性。因此，多糖含量是评价红毛五加皮质量的重要指标。本研究建立了以苯酚—硫酸比色法测定红毛五加皮中多糖的方法，并对不同产地样品进行了含量测定，以期为该药材的质量控制提供 科学 依据。
1 仪器与试药 论文网。
1.1 仪器UV1102紫外/可见分光光度计（上海天美）， 电子 天平（Sartorius BS224S 北京）。 论文代写。
1.2 试药试剂D—葡萄糖对照品（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）。4%苯酚为182℃馏分加蒸馏水配制而成，乙醇、丙酮等试剂均为分析纯。水为蒸馏水。 代写论文。
1.3 样品自采或购买，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加Acanthopanax giraldii Harms的干燥茎皮及木心。样品均粉碎为中粉。
2 方法与结果。
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2.1 红毛五加多糖的提取与精制称取红毛五加茎皮粉末60 g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90℃）、乙醚、80％乙醇回流提取至无色（各约8 h）。残渣挥干乙醇，每次加水800 ml回流提取1 h，共提取4次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩至约200 ml。加95％乙醇使含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得粗多糖。加水配成1％粗多糖溶液，Sevage法脱蛋白［4］。加入30％H2O2脱色［5］。所得溶液减压浓缩至约200 ml，加入95％乙醇使溶液含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得下层多糖。以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多糖，60 ℃真空干燥，得黄白色的红毛五加精多糖粉末。 毕业论文。
2.2 供试品溶液制备方法考察称取红毛五加茎皮粉末约1.0 g，共4份，精密称定，置索氏提取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，每次加水适量回流提取30 min，其中2份提取3次，另2份提取4次，抽滤，合并滤液置500 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。分别精密吸取各供试品溶液0.8 ml，各加入1.2 ml蒸馏水、4％苯酚溶液1.0 ml，摇匀，加入浓硫酸5.0 ml，40 ℃水浴加热15 min，置冰水中冷却5 min，于487 nm测定吸光度。结果无明显差异。 遂确定供试品溶液的制备方法为：精密称取样品粉末约1.0 g，置索氏提取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，加水适量回流提取3次，30 min/次，抽滤，合并滤液置500 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。
2.3 标准曲线的绘制精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，配制成0.30 mg/ml的对照品溶液。分别精密量取该对照品溶液4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 ml置50 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。再精密量取上述稀释的对照品溶液各2.0 ml，按“2.2”项下自“加入4％苯酚溶液1.0 ml……”起，同法测定。以吸光度（Y）对葡萄糖质量浓度（X）进行回归分析，得出其回归方程为Y=0.013 7X—0.000 4 ，r=0.999 8，表明葡萄糖质量浓度在 24.05～54.11 μg /ml范围内呈现良好的线性关系。 论文代写。