凝聚胺抗体筛查技术的改良
［摘要］ 目的：对试管凝聚胺法进行进一步改良，建立一种简便、快速的无须离心的微孔板凝聚胺抗体筛查方法。方法：采用自制的5×10微孔板代替传统的试管，省却离心等步骤进行不规则抗体筛查。结果：将传统的试管凝聚胺法同无须离心的微孔板凝聚胺法进行比较，试管凝聚胺法检测抗D、抗E灵敏度与微孔板法无差异，抗C稍高于微孔板法(1∶5121∶256);输血前筛查200份标本，同时发现2例不规则抗体，分别为抗D和抗M；对以前鉴定的11例不规则抗体，两者都漏检了抗Jka，其他完全一致。结论：无须离心的微孔板凝聚胺法无须试管及离心设备，具有简便快速、经济有效等特点，是一种可行的抗体筛查方法。
Antibody Screening without a Centrifuge with Modified Polybrene Microplate Polybrene。
Abstract:Objective To establish a rapid and simple microplate Polybrene method without acentrifuge for antibody screening.Methods Modify the traditional tube Polybrene method,anddesign a special 5×10 microplate instead of traditional tube,without a centrifuge for antebodyscreening.Results Compared the tube Polybrene method with the microplate Polybrene method,the efficiency has no difference:antiD was 1 024 and antiE is 512,there were some difference about antiC,the former is 512,the later is 256.The antibody screening results were the same.Conclusion The microplate Polybrene method without a centrifuge was simple,rapid,economic and efficient method,what‘s more,which don‘t need tubes and centrifuging and it is feasible method for routine antibody screening.
Key words：Polybrene；Antibody screening；Microplate。
人类红细胞血型非常复杂，到目前为止已发现25个血型系统，包括近270个红细胞血型抗原，除了我们最常见的ABO、Rh血型系统外，还有P、MNS、Lewis、Duffy、Diego、Kidd等血型系统［1］。人们可通过输血、注射、血型不合的妊娠或血液制品的免疫刺激和一些无察觉的刺激，产生ABO血型系统以外的不规则抗体。采用一种有效的不规则抗体筛选方法对患者及献血者进行抗体筛选，对预防不规则抗体引起的免疫性输血反应非常重要。目前进行抗体筛选常用的方法主要有以下几种：凝聚胺试管法、手工抗球蛋白法和微柱凝胶法，其中手工抗球蛋白法由于操作繁琐，费时长，难以作为日常抗体筛选的常规方法，尤其难以进行大量检测；微柱凝胶法由于价格昂贵，目前国内经济上难以接受；凝聚胺试管法与其他方法比较具有灵敏、准确、操作简便、快速(只需3 min~5 min)等优点，文献报道凝聚胺法对Rh、Daffy系统抗体检测敏感性高于抗球蛋白法100倍。目前有采用传统的凝聚胺法进行不规则抗体筛选的报道，一致认为，采用该方法进行不规则抗体筛选简单、快速、准确、省时，是有效可行的［2~4］。Marie Lin［5］建立了一种无须离心的玻片凝聚胺法交叉配血，笔者在实验过程中发现，采用玻片法混匀样品时，样品很容易溢出玻片，导致检测失败，经常需要重复检测，而且很容易造成污染。本研究在玻片凝聚胺法的基础上进一步改进，采用自制的5×10微孔板，建立了一种无须离心的微孔板凝聚胺法进行抗体筛选，该方法保持了传统凝聚胺试管法的优点，同时省却了离心，适合大量操作，现报道如下。
1 材料。
凝聚胺试剂盒(台湾贝索产品)；不规则抗体筛选细胞和鉴定细胞(上海生物医药有限责任公司)；抗球蛋白试剂、抗D、抗E、抗C(英格兰诊断试剂公司)；5×10微孔板(见图1)委托本地塑胶公司制备；细胞洗涤离心机日本KUBOTA产品。
2 方法。
无须离心微孔板凝聚胺法分为三个阶段。致敏阶段：标记好微孔板，每行设计1个阳性对照，1个阴性对照。每孔分别加入2滴待检血清或标准血清，1滴10％的标准红细胞或待检红细胞，然后加入3滴低离子液，用手工混合，室温放置1 min。凝集阶段：每孔加入1滴0．1％Polybrene工作液，手工振荡混合，或者采用振荡仪混合2 min，可见所有的标本都出现凝聚。重悬阶段：加入1滴重悬液，采用手工轻轻振荡混合，或者采用振荡仪混合30 s，至阴性对照非特异性凝聚消失。手工凝聚胺方法按照试剂盒说明书操作。
3 结果。
3.1 致敏阶段结果见图2（略）。
3.2 凝集阶段结果见图3，可见所有孔的红细胞都出现凝集。（略）。
3.3 重悬阶段结果。
3.4 灵敏度检测。
手工凝聚胺法同无须离心的微孔板凝聚胺法两种方法灵敏度比较，见表1。表1 手工凝聚胺法同无需离心的微孔板凝（略）。
3．5 输血前检查。
我们对送检的200个交叉配血标本同时采用手工及无须离心的微孔板凝聚胺法进行抗体筛选，共发现两名患者血清中存在不规则抗体，分别为抗D和抗M，两者的结果完全一致。
3．6 抗体鉴定。
我们对已经鉴定的11例抗体标本同时采用两种方法检测(见表2)，抗Jka两种方法都没有检测出来，无须离心的微孔板凝聚胺法漏检1例抗M(该例结果为肉眼可疑)，该标本采用手工凝聚胺法也是弱凝集。进一步采用抗人球蛋白法进行抗体滴度分析，抗体滴度为1∶4。表2 11例抗体鉴定阳性标本检测比较（略）注：*其中1例结果可疑，肉眼难以确定，该例未计入。