化痰泄浊方对脂肪肝模型大鼠胰岛素抵抗及瘦素的影响
作者：叶放，赵文霞，苗明三，李建国，张永艳。
［摘要］ 目的：探讨化痰泄浊方对大鼠脂肪肝的作用。方法：将SD大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、东宝肝泰组、化痰泄浊方高剂量和低剂量组。用高脂饮食联合四环素腹腔注射法制作大鼠脂肪肝模型，观察大鼠肝脏组织的病理变化，并检测肝功能、血清瘦素、胰岛素抵抗指数，以及肝匀浆甘油三酯（triglyceride, TG）和游离脂肪酸（free fatty acid, FFA）的含量。结果：各用药组的血清瘦素、胰岛素抵抗指数及肝匀浆FFA、TG含量均显著低于模型组（P0.01），且化痰泄浊方组的抗脂肪肝作用显著优于东宝肝泰组（P0.05）。结论：化痰泄浊方治疗脂肪肝的作用机制主要为促进脂质代谢、改善胰岛素及瘦素抵抗。
［关键词］ 化痰泄浊方; 脂肪肝; 游离脂肪酸; 胰岛素抵抗; 瘦素抵抗。
Effects of Huatan Xiezhuo Recipe on insulin resistance and leptin in rats with fatty liver。
ABSTRACT Objective: To observe the effects of Huatan Xiezhuo Recipe (HTXZR) on fatty liver of rats. Methods:Fortyeight SD rats were randomly divided into five groups: normal control group, untreated group, Dongbao Gantai Tablet (DBGTT)treated group, lowdose HTXZRtreated group and highdose HTXZRtreated group. Fatty liver was induced in the rats by hyperlipid diet and intraperitoneal injection of tetracycline. The pathological changes of liver tissues in rats were observed, and the liver function, serum leptin, insulin resistance index, triglyceride (TG) and free fatty acid (FFA) in the liver were detected. Results: The levels of serum leptin, insulin resistance index, FFA and TG in rats of the three treated groups were lower than those of the untreated group (P0.01), and such effects in the HTXZRtreated groups were more significant than those in the DBGTTtreated group (P0.05). Conclusion:The main action mechanisms of HTXZR in treating fatty liver are probably to promote the lipid metabolism, decrease the leptin and insulin resistance.
KEY WORDS Huatan Xiezhuo Recipe; fatty liver; free fatty acid; insulin resistance; leptin resistance。
当外源性脂肪酸供给增加，游离脂肪酸（free fatty acid, FFA）运输至肝脏过多时，肝细胞内FFA合成甘油三酯（triglyceride, TG）就会增多，从而导致肝内脂肪堆积。既往研究表明，胰岛素抵抗（insulin resistance, IR）和瘦素（leptin）抵抗以及两者之间的相互作用在脂肪肝发病机制中起着重要的作用［1,2］。化痰泄浊法是中医治疗脂肪肝最常用的治法。本实验旨在研究化痰泄浊方（Huatan Xiezhuo Recipe, HTXZR）对高脂饮食联合四环素腹腔注射所致大鼠脂肪肝模型的干预作用及影响环节。
1 材料与方法。
1.1 材料。
1.1.1 动物 健康雄性SD大鼠48只，体质量（150±10）g，河南医科大学动物实验中心提供。饲养于室温（20±3）℃、明暗各12 h的清洁级动物实验室中，予以自由饮水和进食。
1.1.2 药物与试剂 化痰泄浊方浓缩液由泽泻、荷叶、莱菔子、大黄按生药比例4∶3∶2∶1制成，浓缩液含生药2 g/ml，由河南中医学院第一附属医院制剂室生产，批号20020415；东宝肝泰片（Dongbao Gantai Tablet, DBGTT）由中国通化东宝药业股份有限公司生产，0.4 g/片，批号011106；四环素粉针剂，250 mg/支，江苏常州动物保健品有限公司生产，批号010903；胆固醇（分析纯），购自上海化学试剂站分装厂，批号010903；丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）检测试剂盒，购自四川迈克科技有限责任公司；TG试剂盒，购自温州东欧生物工程有限公司；FFA测试盒，购自南京建成生物医学研究所；胰岛素放射免疫分析药盒(批号020615)、瘦素放射免疫分析药盒(批号020617)，中国原子能科学研究所提供。
1.1.3 主要仪器 LXJⅡ离心沉淀机，上海医用分析仪器厂生产；722型光栅分光光度计、7150型（BT2000）全自动生化分析仪、H7500透射电子显微镜，日本日立公司产品。
1.2 方法。
1.2.1 分组与模型制作 SD大鼠48只，常规饲养1周后随机分为5组：正常对照组、模型组、DBGTT组、HTXZR高剂量和低剂量组，其中正常对照组8只，其余4组各10只。正常对照组予以基础饲料喂养，其余4组均以高脂饲料（84％基础饲料＋10％猪油＋5%蛋黄粉+1％胆固醇）喂养，并于造模第1天予以腹腔注射四环素150 mg/kg，后每隔6 d腹腔注射四环素110 mg/kg 1次，共6次。
1.2.2 给药方法 自造模第1天起，除正常对照组外，其余各组均按5 ml・kg1・d1，1次/d，分别灌服生理盐水或相应的药物溶液。HTXZR高剂量和低剂量组的给药浓度分别为HTXZR 2 g/ml和1 g/ml（相当于成人用药剂量的20倍和10倍）；DBGTT溶于蒸馏水中，制成浓度为0.06 g/ml的溶液，给药浓度为0.225 g・kg1・d1（相当于成人用药剂量的10倍）。连续7周。
1.2.3 标本采集 于造模第7周结束时处死各组动物。方法：隔夜禁食，次日以2％戊巴比妥钠溶液按1 ml/kg予以腹腔内注射麻醉后，自腔静脉采血，然后迅速取出肝脏称取肝湿重，取肝左叶组织0.1 cm×0.1 cm×0.6 cm标本2～4块用戊二醛固定，再取肝左叶组织0.5 cm×1 cm×0.3 cm标本1块，用10％磷酸缓冲甲醛液固定。最后将剩余肝组织于－70 ℃保存，待作肝匀浆。所采血液于30 min之内离心取血清待检。
1.2.4 检测指标及测定方法 （1）血清生化指标检测：采血5 ml静置30 min后，3 000 r/min离心10 min，取血清用全自动生化分析仪检测血清中TG、ALT、AST和血糖水平。（2）血清瘦素及空腹胰岛素定量：采用放射免疫法，按推荐公式计算胰岛素抵抗指数（胰岛素抵抗指数=空腹血糖含量×空腹胰岛素含量/22.5）［3］。（3）肝匀浆TG检测：取肝左叶组织0.2 g，4 ℃下制成10%肝匀浆，用氯仿∶甲醇为2∶1溶液抽提脂质，取上清可溶部分，用酶法测定TG（单位：mmol/L），代表肝内脂肪含量。（4）肝匀浆FFA检测：取1％肝匀浆，离心后取上清液30 μl，在722型光栅分光光度计上进行比色，用酶法检测，按试剂盒操作步骤进行。
1.2.5 肝脏病理观察 （1）光镜观察：取肝左叶，中性甲醛固定肝标本，予以石蜡切片，HE染色后，观察肝脏组织的病理变化。（2）电镜观察：标本经戊二醛固定，环氧树脂包埋，超薄切片后用透射电镜观察肝脏组织超微结构的变化。
1.2.6 统计学方法 所有实验数据均用SPSS 10.0统计软件进行分析，计量资料以x±s表示，采用多因素方差分析的两两比较法，等级资料采用秩和检验。