富含血小板血浆和rhBMP—2复合物诱导兔下颌骨再生的实验研究
作者：蔡华雄, 宋洁文, 赵小朋, 阮毅, 郑美华, 李海刚。
【摘要】 【目的】 研究自体富含血小板血浆（PRP）和人重组骨形成蛋白（rhBMP—2）对下颌骨组织形成的促进作用。【方法】 成年新西兰白兔45只，随机分为3组，每组15只，选择右侧下颌骨为实验侧、左侧下颌骨为对照侧。A组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和PRP，B组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和rhBMP—2，C组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵、PRP和rhBMP—2，各组左侧下颌骨缺损区只放置明胶海绵。分别于术后2、4、8周各取5只兔子进行放射性核素99mTc—MDP骨显像、X线片和组织学切片检查。【结果】 A组动物右侧放射性核素计数在术后2、4周时明显高于左侧（Ρ 0.05）；B组动物右侧放射性核素计数在第4周时高于左侧（Ρ0.05），而在第2、8周时低于左侧（Ρ 0.05）；C组动物右侧放射性核素计数在第2、4周时均高于左侧（Ρ0.05），在第8周时两侧没有明显差别（Ρ 0.05）。【结论】 PRP单独或与rhBMP—2复合均能促进下颌骨组织的增长。
【关键词】 富含血小板血浆; 骨形成蛋白; 骨再生。
] 牙槽骨是支持、稳固牙齿、维护咀嚼功能的重要组织，由于炎症、外伤、肿瘤、功能性萎缩等原因，牙槽骨非常容易吸收、丧失，进而影响咀嚼功能。牙槽骨组织的吸收、丧失，导致牙齿松动（牙周炎），义齿、种植牙修复困难，进行牙槽骨移植是重建牙槽骨的重要手段。关于牙槽骨的移植，主要是选择植骨材料的问题。随着医学的不断发展，人们已经发现了众多可供移植的材料，如羟基磷灰石/脱矿骨复合物、医学组织工程材料支架等[1、2]，但至今为止尚未找到一种既安全、经济，又有理想效果的牙槽骨植骨材料。本实验通过同位素骨显影技术观察自体富含血小板血浆（platelet rich plasma, PRP）及人重组骨形成蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein—2, rhBMP—2）对兔下颌骨缺损区骨组织代谢的影响，现报道如下。
1 材料和方法。
1.1 材料。
45只健康成年新西兰白兔（南方医院实验动物中心提供），雌雄不限，体质量2.0～2.5 kg，分笼饲养。人重组骨形成蛋白—2（recombinant human bone morphogenetic protein—2, rhBMP—2），由广州威佳科技有限公司提供。自体富含血小板血浆（PRP），手术前制备。以明胶海棉作为PRP及rhBMP—2的载体。
1.2 PRP的制备。
0.03 g/L戊巴比妥钠（0.03 g/kg）腹腔注射麻醉，从兔耳中央动脉抽取5 mL自体血，装在预先放有0.5 mL复方枸橼酸钠抗凝剂的10 mL离心管中,参照Landeaserg法[3]进行PRP提取：将新鲜血分两次离心，第一次离心1 000 r/min（200 × g）×10 min，吸管吸取全部上清液至交界面下3 mm，移至另一离心管，平衡后再次离心1 000 r/min（200×g）×10 min，此时离心管中液体分为两层，吸取约3/4上清液弃掉，摇匀剩余液体，即为PRP，摇匀，备用。经检测，离心前血小板计数为336×109/L，离心后血小板计数为1 498×109/L，离心后的血小板浓度是离心前的450%左右。制作过程严格无菌操作。
1.3 手术与分组。
健康成年新西兰白兔45只，随机分为A、B、C3组，每组15只。每只兔在双侧下颌骨体部，即近犬齿、前臼齿根尖处建立骨缺损区，右侧为实验侧，其中A组放置PRP和明胶海绵，B组放置rhBMP—2和明胶海绵，C组放置PRP、 rhBMP—2和明胶海绵；左侧为对照侧，均只放置明胶海绵。
1.4 实验方法。
0.03 g/L戊巴比妥钠按0.03 g/kg腹腔注射麻醉，显效后在手术区局部注射0.02 g/L利多卡因。常规备皮、消毒、铺巾。沿下颌骨下缘作平行切口，长度为3～4 cm，分层切开皮肤、皮下组织，暴露下颌骨下缘及下颌骨颊面，用裂钻在下颌骨体部颊侧中下1/3处制备缺损区，长、宽、深分别为8 mm×6 mm×2 mm，手术时使用生理盐水降温，术后使用庆大霉素注射液冲洗防止感染。缺损区制备后，兔子右侧：A组以明胶海绵加PRP填塞，B组以明胶海绵加rhBMP—2填塞，C组以明胶海绵加PRP及rhBMP—2填塞；左侧均以明胶海绵填塞。严密缝合伤口，分笼饲养。术后给予青霉素肌注预防感染，剂量为40万U/次，每天一次，持续3 d。 1.5 观察指标。
1.5.1 放射性核素骨显像 各组分别在术后第2、4、8周时随机抽取5只大白兔，由耳缘静脉注射962MBq99mTc—MDP，3 h后在全麻状态下将大白兔仰卧固定，取其下颌骨正面及双侧摄取相的静态骨显像。在双侧缺损区取约10 mm × 8 mm的面积作为感兴趣区（region of interest, ROI），使用高分辨准直器γ照相机（Millennium MG）进行骨显像，计算机软件分别计算每个ROI的平均放射性计数，并以下颌颏部正中同样面积的平均放射性计数比值相比较。为减少误差，测量时每个ROI的放射性平均计数重复测量5次，取平均值。在实验过程中对核医学医师采用单盲法。
1.5.2 X线片检查 经过核素检查后的大白兔，使用血管内注射空气法处死，取标本照X光照片，观察缺损区内新骨形成情况。
1.5.3 组织学观察 上述标本经100 ml/L福尔马林固定，50 ml/L硝酸脱钙，系列脱水，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜观察。
1.6 统计分析。
采用配对t检验，SPSS 11.5软件进行统计分析。
2 结 果。
2.1 99mTc—MDP骨显像。
A组动物实验侧放射性计数在第2、4周时明显高于对照侧（Ρ 0.05），而8周时放射性计数与对照侧相比无显著性差别（Ρ 0.05）；B组动物实验侧放射性计数在第2、8周时低于对照侧（Ρ0.05），而第4周时高于对照侧（Ρ 0.05）；C组动物实验侧放射性计数在第2、4周时随着时间的推移明显增高，且明显高于对照组（Ρ 0.05），到第8周时放射性计数明显降低，但与对照组相比无显著性差别（Ρ 0.05，见表1）。