初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响
作者：黄小容, 王慧娟，贺定祥，周英。
【摘要】 目的初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响。方法采用多巴色素法，底物为L—多巴，测定山慈姑及其伪品提取物对酪氨酸酶的激活作用；薄层色谱法对药材中的酪氨酸进行定性鉴别。结果山慈姑的激活作用最高，丽江山慈姑和金果榄作用不明显，白及呈抑制作用；薄层检测显示山慈姑、丽江山慈姑和金果榄中含有酪氨酸。结论 初步认为酪氨酸为山慈姑等激活酪氨酸酶活性作用的主要成分之一。
【关键词】 山慈姑; 伪品; 酪氨酸酶; 酪氨酸; 激活作用。
Abstract：Objective The effects of Cremastra appendiculata (D.Don) Makino and spurious breed on the activity of tyrosinase were studied. MethodsTyrosinase activity was determined by the dopachrome method using L—DOPA as the substrate and the amount of dopachrome in the reactiom mixture was measured by spectrophotometer. Tyrosine was identified by TLC. ResultsThe results showed that the Cremastra appendiculata (D.Don) Makino significantly increased the activity of tyrosinase,but the Rhizoma Bletillae inhibited . The Cremastra appendiculata (D.Don) Makino, Iphigenia indica Kunth et Benth and Tinospora capilipes Gagnep had tyrosine. ConclusionTyrosine is one of the major components of the Cremastra appendiculata (D.Don) Makino, Iphigenia indica Kunth et Benth and Tinospora capilipes Gagnep to stimulate the activity of tyrosinase.
Key words：Cremastra appendiculata Makino; Spurious breed; Tyrosinase; Tyrosine; Effect 酪氨酸酶又称多酚氧化酶,是哺乳动物体内黑素代谢的关键酶。对酪氨酸酶活性调节可直接影响黑色素的合成，其中酪氨酸、多巴、铜等可影响酪氨酸酶的活性［1］，其活性改变可引起色素障碍性皮肤病如白癜风。因此，能够激活酪氨酸酶活性并加速黑色素生成的药物，均可提高因缺乏黑色素所致疾病的疗效［2］。 根据闫军等［3］报道，山慈姑具有激活酪氨酸酶活性的作用。作者对山慈姑进行化学成分研究中，分离得到了影响酪氨酸酶活性的物质——酪氨酸。同时，由于市场上山慈姑的品种比较混乱，很多地方常以白及、金果榄、丽江山慈姑等的球茎或块根代替正品使用［4］。本实验选用山慈姑及伪品进行研究，采用多巴色素法和薄层色谱法，初探对酪氨酸酶活性的影响。
1 材料。
1.1 药材山慈姑药材购自贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司；白及、金果榄、丽江山慈姑药材购自贵州省药材公司。由贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司贺定祥鉴定。
1.2 试剂和仪器L—多巴，蘑菇酪氨酸酶(Sigma公司产品)，酪氨酸(从山慈姑中分离得到)，其它试剂均为市售分析纯。T6新世纪紫外可见分光光度计(北京谱析通用仪器有限责任公司)，FA2004电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)。
2 方法。
2.1 样品的制备山慈姑、白及、金果榄和丽江山慈姑生药粉碎(100目)，各称取4 g，分别用50%乙醇40 ml浸泡14 d。过滤，取续滤液1 ml，用pH 6.8磷酸缓冲液定容至25 ml，备用。
2.2 酪氨酸酶活性测定参照Matsuda等［5］报道方法。分别取上述样品液2 ml，依次加入0.004 mol/L的L—多巴反应液2 ml与蘑菇酪氨酸酶2 ml(200 U)，混合，立即置分光光度计上于475 nm处测吸收值，每分钟记录一次，连续记录20 min。同时，以pH 6.8磷酸缓冲液作为空白对照。酪氨酸酶激活率按下列公式计算。 激活率（%）=［(C—D)/t—(A—B)/t］/(A—B)/t×100%。 其中，A=A475—药+酶； B= A475—药—酶；C= A475+药+酶；D= A475+药—酶，t为相对应的时间。
2.3 数据处理和统计方法采用配对计量资料t检验，实验重复3次。
2.4 薄层层析分别取白及、金果榄、山慈姑、丽江山慈姑、酪氨酸溶液点样于同一块硅胶薄层板上，编号为1、2、3、4、5。以正丁醇—水—乙酸(4∶1∶1)为展开剂，展开，晾干。喷以1%茚三酮乙醇溶液，吹干，显色。