更年期大鼠Th1/Th2平衡与脾细胞凋亡

作者：蒋竞，张绍芬，邹世恩，夏贤，陈王旬，刘瑞梓。

【关键词】 更年期。

摘要：目的 了解更年期大鼠脾细胞凋亡与辅助性T细胞1(Thelper l, Th1)和辅助性T细胞2(Thelper 2, Th2)型细胞因子的增龄性改变。方法 应用Annexin VFITC/PI双染色流式细胞仪测定脾细胞凋亡率； ELISA法测血清γ干扰素(interferonγ, IFNγ)、白介素4(interleukin4, IL4)水平。结果 更年期组大鼠脾细胞凋亡率(10.3% vs. 7.7%, P0.05)、血清IFNγ质量浓度明显高于年轻组大鼠(23.80ng/L vs. 10.92ng/L，P0.01)；更年期组大鼠与年轻组相比血清IL4质量浓度有下降趋势，但差别无显著意义(0.1296ng/L vs. 0.3094ng/L, P0.05)；更年期组血清IFNγ/IL4比值明显高于年轻组(183.64 vs. 35.29，P0.01)，Th1/Th2平衡朝Th1漂移。结论 大鼠衰老过程中Th1/Th2平衡朝Th1漂移，脾细胞凋亡增加与IFNγ水平增高有关。　　关键词：更年期；脾细胞；凋亡；Th1；Th2。

The changes of Th1/Th2 balance and apoptosis in splenocyte of menopausal rats。

ABSTRACT: Objective To investigate the relation between the apoptosis in splenocyte and the changes of Th1/Th2 balance in serum of menopausal rats. Methods Twenty female SD rats were divided into two groups: menopausal group(n=10;15 months), young group (n=10; 5.5 months). The apoptosis in splenocyte of rats was measured by Annexin VFITC/PI flow cytometric assay. The levels of IFNγ and IL4 in serum were measured by ELISA. Results The percentages of apoptosis cells in splenocyte of menopausal rats were significantly higher than that of young rats. The serum IFNγ level of menopausal rats was significantly higher than that of young rats(23.80ng/L vs. 10.92ng/L, P0.01). The level of IL4 was similar in menopausal and young groups. Conclusion The increasing of apoptosis in splenocyte of menopausal rats is related to the increasing of IFNγ levels with aging.

KEY WORDS: menopause; splenocyte; apoptosis; Th1; Th2。

人体免疫功能随增龄而衰退是衰老过程中的一个关键因素，以致对感染及某些自身免疫性疾病易感。资料显示衰老时免疫功能的变化与免疫细胞凋亡密切相关[1]。近年研究发现[2]，老年人外周血CD+4T细胞产生γ干扰素(cinterferon γ, IFNγ)高于年轻组，而产生白介素4(interleukin4, IL4)降低，提示老年个体存在Th1极化现象。目前有关细胞因子变化与免疫细胞凋亡之间关系的研究较少。有研究表明活化诱导的淋巴细胞凋亡(activationinduced cell death, AICD)在免疫应答的负调节中发挥重要作用，而细胞因子能影响AICD[3]。我们通过检测脾细胞凋亡率，测定血清IFNγ、IL4和计算IFNγ/IL4比值，来探讨更年期大鼠脾细胞凋亡的变化及Th1、Th2型细胞因子的改变，为深入研究更年期随年龄增长而发生的免疫功能变化提供实验依据。

1 材料与方法。

1.1 实验动物 采用清洁级SD雌性大鼠(由本校上海医学院实验动物部提供，按清洁级饲养，自由饮水，标准颗粒饲料喂养，合格证号：scsk 沪动0033号)共20只，以月龄分为两组，更年期组10只(15月龄)，体质量(488.38±82.10)g；年轻组10只(5.5月龄)，体质量(282.76±9.67)g。两组大鼠饲养环境相同。

1.2 血清IFNγ和IL4测定 颈动脉插管采血，留血清，ELISA法测血清IFNγ、IL4质量浓度。

1.3 脾细胞悬液制备及培养 无菌取脾脏，研磨，TrisNH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤，用于脾细胞培养。将脾细胞置37℃、5%(体积分数)CO2培养24h后，流式细胞仪进行凋亡率测定。

1.4 Annexin VFITC、PI双染色流式细胞仪测定脾细胞凋亡率 流式细胞仪(BRYTE HS型)为美国Biorad公司的产品。凋亡试剂盒购自晶美生物工程上海分公司。按照Annexin VFITC凋亡试剂盒说明步骤进行。结果判断：荧光显微镜下可见凋亡细胞呈绿色荧光，坏死细胞呈红绿或黄绿荧光。双标记流式细胞仪上散点图可见左下象限显示活细胞(FITC—/PI—)，右上象限显示坏死细胞(FITC+/PI+)，而右下象限为凋亡细胞(FITC+/PI—)。

1.5 统计学处理 应用SPSS10.0软件对数据进行统计分析，组间比较采用t检验，各组指标均以±s表示。

2 结果。

2.1 两组大鼠血清IFNγ、IL4和 IFNγ/IL4比较 更年期组大鼠血清IFNγ质量浓度明显高于年轻组(P0.01)；更年期组血清IL4质量浓度与年轻组相比有下降趋势，但差别无统计学意义(P0.05)；更年期组血清IFNγ/IL4比值明显高于年轻组(P0.01，表1)。

表1 两组大鼠血清 IFNγ、 IL4和IFNγ/IL4比较（略）。

Table 1 Concentrations of IFNγ, IL4 and IFNγ/IL4 of two groups。

2.2 两组大鼠脾细胞凋亡率 年轻组脾细胞凋亡率为(7.7±2.3)% ，更年期组为(10.3 ±4.1)%，更年期组高于年轻组(P0.05)。双重染色流式细胞散点图见图1。

图1 annexin V FITC/PI双重染色流式细胞仪检测脾细胞凋亡率（略）。

Fig.1 Apoptosis of splenocytes detected by annexin VFITC/PI flow cytometry。

a: Young group 5.7%; b: Menopausal group 10.2%。