两种方法制备水飞蓟宾固体脂质纳米粒的比较
作者：厉英超，董蕾，贾皑，苌新明，薛挥。
Comparative studies of silibinin contained solid lipid nanoparticles prepared by two methods。
【Abstract】 AIM: To evaluate the potential of the preparatory methods of solid lipid nanoparticles (SLN) carrying silibinin (SIL) extracted from traditional Chinese medicinal herbs, and to study the physicochemical characteristics of the SILSLN produced by 2 different methods. METHODS: SILSLN was prepared by ultrasonication or high pressure homogenization. Transmission electron microscopy was employed to study the shape. Particle characterization system and zeta potential analyzer were used to study the particle diameter and zeta potential of SLN in suspension. The entrapment efficiency was determined by sephadex gel chromatography and highperformance liquid chromatography (HPLC). The stability of SLN was also studied. RESULTS: The SILSLN prepared by ultrasonication was plateletshaped and irregular, and the SILSLN prepared by high pressure homogenization was spherical and regular in shape. The particle diameters of SILSLN prepared by ultrasonication and high pressure homogenization were (165±7) nm and (157±6) nm separately (P0.05). The Zeta potentials were (—28.35±2.72) mv and (—35.36±2.68) mv separately (P0.001). The entrapment efficiencies were (90.59±0.89)% and (95.64±1.33)% (P＜0.001) separately. SILSLN prepared by high pressure homogenization showed sufficient longterm stability with only slight particle growth (P0.05) after storage at room temperature for 4 weeks. CONCLUSION: High pressure homogenization is demonstrated to be a more suitable method than ultrasonication to prepare the smaller, steadier and highly incorporated SILSLN.
【Keywords】 silibinin; solid lipid nanoparticles; ultrasonics; high pressure homogenization。
【摘要】 目的：探索将中药水飞蓟宾（SIL）制备成固体脂质纳米粒（SLN）的方法，并探讨SILSLN的主要性质. 方法：分别采用超声法和高压乳匀法制备SILSLN. 在电镜下观察其形态，以Mastersizer 2000粒度分析仪和Zetasizer Nano电位分析仪测定其粒径和Zeta电位，以葡聚糖凝胶柱层析法和HPLC测定其包封率，并观察SLN的稳定性. 结果：超声法制备的SILSLN在透射电镜下呈片状存在，形态不规则，高压乳匀法制备的SILSLN呈球状，形态规则. 超声法和高压乳匀法制备的SILSLN粒径分别为(165±7) nm和(157±6) nm (P0.05)； Zeta电位分别为(—28.35±2.72) mv和(—35.36±2.68) mv (P0.001)； 包封率分别为(90.59±0.89)%和(95.64±1.33)% (P0.001). 高压乳匀法制备的SILSLN室温放置4 wk后，粒径无明显增加(P0.05). 结论：高压乳匀法制备SILSLN具有粒径小、稳定性和包封率高的特点，优于超声法.
固体脂质纳米粒（solid lipid nanoparticles, SLN）是在20世纪90年代初发展起来的一种可替代乳剂、脂质体和聚合纳米粒的新型胶体给药系统［1］. 固体脂质纳米粒以固态的天然或合成的类脂为载体，将药物包载于类脂中制成，平均粒径约50～1000纳米. 它所含有的固体脂质成分是机体可利用、可生物降解的，与聚合纳米粒相比，它的毒性更低，由于药物被包封在固体脂粒的骨架中，不存在药物在贮存过程中的泄漏问题，具有缓释、控释和靶向作用［2—3］. 静脉给药后，很快被网状内皮系统吞噬而被动进入肝脏，达到肝靶向作用［4］. 水飞蓟是菊科草本植物，其活性成分主要存在于种子中，称水飞蓟素，主要由水飞蓟宾(silibinin or silybin, SIL)、水飞蓟宁、水飞蓟亭等同分异构体组成. 在水飞蓟素中，SIL含量最多，活性也最高［5］. 由于SIL难溶于水，生物利用度低，国内外都在积极研制SIL的新剂型，以提高其生物利用度. 本研究利用超声法和高压乳匀法分别制备水飞蓟宾固体脂质纳米粒（SILSLN），并比较了两种方法制备的SILSLN的不同.
1材料和方法。
1.1材料SIL（纯度95％，盘锦格林恩生物资源开发有限公司）；豆磷脂（北京奥博星生物技术责任有限公司）；硬脂酸（天津市天大化学试剂厂）；葡聚糖凝胶G50（天津化学制剂二厂）；无水乙醇（西安化学试剂厂）；甲醇（天津市科密欧化学试剂开发中心，HPLC纯）；蒸馏水（自制一级水，三级水）；甘油（厦门甘油厂）. Mastersizer 2000 粒度分析仪（英国马尔文公司）；Zetasizer Nano电位分析仪（英国马尔文公司）；LC2010高效液相色谱仪（日本岛津公司）；JY 92II超声细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）；APV2000高压乳匀机（丹麦APV公司）；H600透射电子显微镜（日本Hitachi公司）；BP121S型电子天平（德国sartorius公司）；852恒温磁力搅拌加热器（国华电器有限公司）；U2000型紫外扫描仪（上海光华仪器厂）.
1.2方法。
1.2.1SILSLN的制备经过单因素考察和正交实验设计优化，确定较优制备工艺为：精密称取1.5 g硬脂酸,1.0 g豆磷脂和SIL 75 mg，在70℃水浴中溶解于10 mL无水乙醇中，形成有机相溶液. 量取45 mL甘油分散于75 mL蒸馏水中形成水相. 将水相置于恒温磁力搅拌器上，温度为80℃，将有机相注入水相中，搅拌2 h，使成乳白色混悬液，形成初乳. 按以下两种方法分别处理：①超声法：将上述初乳超声处理300 s，搅拌至室温，用0.45 μm微孔滤膜过滤除去超声探头释放的钛颗粒等杂质，得SILSLN水分散体，4℃密封保存. ②高压乳匀法：在高压乳匀机上50 MPa乳匀5次，即得SILSLN，4℃密封保存.
1.2.2电镜观察取一滴SILSLN滴加至铜网上，用20 g/L磷钨酸负染30 s，在透射电镜下观察并拍摄照片.
1.2.3粒径及Zeta电位的测定取SILSLN适量，蒸馏水稀释20倍后，用粒度分析仪和电位分析仪分别测定所制备的SLN的粒径和Zeta电位. 按照上述超声法和高压乳匀法各制备9份样品，计算平均粒径和Zeta电位（n=9）.
1.2.4包封率的测定色谱条件色谱柱：Planetsil C18(4.6 mm×15 cm)柱；流动相：甲醇0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(用磷酸调pH 3.0，35∶65)；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；检测波长288 nm.
将SIL甲醇对照品储备液用流动相稀释成浓度为0.055，0.222，0.887，3.547，14.188，28.375，56.750，113.500 μg/mL，照上述色谱条件进行测定. 以SIL质量浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归分析，判断线性关系.
精密量取SILSLN水分散体0.5 mL，用流动相定容至5.0 mL，测定其中SIL含量（W1）. 移取SILSLN 0.5 mL上样于填充好的Sephadex凝胶柱，以蒸馏水为洗脱剂，接取其中带有白色乳光的部分,定容至5 mL，应用HPLC测定其中SIL含量（W2）. 包封率按以下公式计算：包封率(%)=W2/W1×100%.