峨眉产味连指纹图谱研究
作者：蒋合众，马超英，刘军，林琳，吴晓青。
Abstract：ObjectiveTo establish a sensitive and specific HPLC method for the quality control of Emei‘s Coptis chinensis Franch.MethodsThe chromatographic fingerprint of Emei‘s Coptis chinensis Franch was obtained by RP—HPLC(DAD) and the gradient elution mode was applied in chromatographic separation,data was analyzed by Fingerprint Similarity Evaluation Software to compare the similarity of samples.ResultsThe HPLC fingerprint of Emei‘s Coptis chinensis Franch was established preliminarily,showing 9 characteristic peaks,by comparision of the retention time of chemical standards,peak 6,8 and 9 were identified as Jatrorrhizine, Palmatine and Berberine.ConclusionThe HPLC fingerprint method is repeatable and can be used for quality control of Emei‘s Coptis chinensis Franch.
Key words： Emei‘s Coptis chinensis Franch； Fingerprint； HPLC 峨眉产味连为四川著名道地药材，来源于毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch（习称“味连”）的根茎，秋季采挖，除去须根及泥沙，干燥，去除残留须根［1］。味苦、性寒，入心、肝、胃、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒的功能，是一种临床应用广泛的清热燥湿解毒药，常用于湿热痞满、呕吐、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、牙痛、消渴及痈肿疔疮；外治湿疹、湿疮、耳道流脓、中耳炎等肿疡类疾病［2～4］。味连根茎的主要成分为药根碱(jatrorrhizine)、黄连碱(coptisine)、巴马汀(palmatine)、小檗碱(berberine)、伪小檗碱(epiberberine)等季胺型生物碱［5］。其中小檗碱含量最高，约5%～8%，一般用这些生物碱在生药中的含量来评价黄连的质量，但单一成分难以反映黄连的整体特征，建立简便可行的指纹图谱方法是目前更好评价黄连质量的有效方法，也是中药标准化的一项重要内容。目前色谱指纹图谱技术已成为中药质量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色谱法，对四川峨眉产味连GAP基地主要产地（四川峨眉山市龙池镇）的样品进行研究，制定出峨眉产味连的指纹图谱。
1 仪器与试药。
1.1 仪器岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，CLASS—VP色谱工作站；色谱柱：Waters RP18（4.6 mm×250 mm）。
1.2 试剂乙腈、甲醇为色谱纯（天津科密欧公司），水为超纯水（实验室自制），其他试剂为分析纯。
1.3 对照品盐酸小檗碱（批号110713—200208，供含量测定用）、盐酸巴马汀（批号0732—200005，供鉴别用）和盐酸药根碱对照品（批号0733—200005，供鉴别用）均由中国药品生物制品检定所提供。
1.4 样品。
味连根茎，生长年限为4年，采集时间2004—12，采集地点为峨眉龙池，经西南交通大学药学院宋良科副教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch（味连），经低温干燥，粉碎，过60目筛备用。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件。
岛津高效液相色谱仪，二极管阵列检测器；色谱柱：Waters RP18（4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈—磷酸二氢钾溶液（0.033 mol/L，磷酸调pH=2.6）为流动相梯度洗脱，流速1.0 ml/min，梯度洗脱条件见表1；检测波长268 nm；柱温30℃；进样量：供试品和对照品各10 μl。表1 味连指纹图谱流动相梯度洗脱条件（略）。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品各约0.001 g，加甲醇溶解并定容至10 ml，制成浓度为0.1 mg/ml的标准混合溶液，待用。