尼莫同治疗小鼠脑梗塞的时间窗研究
作者：何国厚席刚明魏国耀。
【关键词】 尼莫同。
【摘要】 目的 研究尼莫同治疗小鼠脑梗塞的最佳时机。方法 经右侧颈总动脉将尼龙单丝线栓至大脑中动脉造成永久性缺血模型。经尾静脉及腹腔给药。动物均于术后第7天处死取脑，用TTC染色、图像分析仪测定脑梗塞体积。结果 单缺组脑梗塞体积最大，术后6h以内及术前给药组脑梗塞体积较小，术后12h以后给药组脑梗塞体积介于两者之间。结论 术前及术后6h以内给药可使小鼠脑梗塞体积减少，这一段时间可能为治疗时间窗。
【Abstract】 Objective To find out the therapeutic time window of nimotop in focal cerebral ischemia of mice.Methods Focal ischemic models of middle cerebral artery occlusion（MCAO）were established by inserting nylon monofilament through the right common carotid artery into the anterior cerebral artery.Nimotop was injected through caudal vein and abdominal cavity.The infarct size were measured by TTC stain and image analyzer.Results The inˉfarct volume was the biggest in untreatment group，the smallest in preoperative treatment and postoperative treatment group within6h，but the infarct size didn’t reduce administration after12h.Conclusion The optimal therapeutic time window of nimotop is less than6h after MCAO of mice.
Key words nimotop cerebral infarction mice time window。
脑血流完全阻断后，缺血脑组织迅速产生不可逆性损伤，尤以缺血中心区往往为不可逆性损伤。但缺血周边区，即半暗带，不可逆性损伤比较缓慢，通过治疗干预是有可能被挽救的。但缺血半暗带的存在有一定的时限性，即挽救缺血半暗带存在着治疗时间窗，在时间窗内给予治疗是有效的。尼莫地平是一种L型钙通道拮抗剂，可抑制电压调节和受体依赖性钙通道、减少因钙离子内流所致的脑细胞死亡。在应用尼莫地平治疗急性缺血卒中的10余年研究中，对其疗效评价仍未取得一致，可能与开始治疗的时机差异有关。因此，合理选择时机，适时使用尼莫地平，寻找其有效治疗时间窗，显得非常重要。本研究选择小鼠为观察对象，建立大脑中动脉栓线模型，应用TTC染色，观察梗塞体积的变化，以及尼莫同治疗干预情况，以确定尼莫同治疗时间窗，以指导临床应用。
1 材料和方法。
1.1 实验动物与分组 健康雄性昆明小鼠84只，平均体重（32.40±4.28）g，从武汉大学医学院动物实验中心购得。在自然光线下饲养1周后，随机分为单纯缺血组，缺血前预防给药组，缺血后0、1、2、3、4、5、6、12、24、48、72h给药组，假手术组，共14组，每组6只动物。
1.2 小鼠大脑中动脉栓线模型的制作 用10%水合氯醛（0.03ml/10g体重）腹腔注射麻醉动物后，仰卧位固定于手术台上，沿颈前正中剪开约1cm长的切口。在SXP—1B手术显微镜下，依次暴露右侧颈总动脉，颈外动脉起始部，翼腭动脉。结扎颈外动脉和翼腭动脉起始部。然后将颈总动 脉近心端结扎，靠近分叉部套一结扎线，并上一微型动脉夹。于两线之间，将颈总动脉剪一小口，根据动物大小选择0.2号、0.3号或0.4号尼龙单丝线，迅速经切口插入，松开动脉夹，继续插入。当丝线进入约9mm时，即有轻微的阻挡感，立即停止送线。此时线的头端恰好抵达大脑前中动脉分叉部。结扎分叉部位的丝线。剪除多余的单丝线。于切口内点入几滴庆大霉素后，逐层缝合软组织及皮肤，再消毒后，置于红外灯下保温。
1.3 给药方法 尼莫同由Bayer公司生产，每瓶50ml，含尼莫通10mg，首次经尾静脉给药1次，以后每日经腹腔给药1次。给药量按每日每公斤体重30μg换算。
1.4 脑梗塞体积的测定 各组小鼠手术后第7天，麻醉后立即取脑，置—70℃低温冰箱冷冻后，切成2mm厚的冠状脑片。用2%TTC（红四氮唑，用0.1MPB配制），于37℃染色30min，正常脑组织呈红色，梗塞脑组织呈白色。
将TTC染色的脑片裱于玻片上，每个脑所切得的脑片裱于一张玻片上，用摄像机录入电脑内，用图像处理软件，测定每张脑片上的梗塞面积，乘以脑片的厚度，即得脑片梗塞体积的近似值，所有脑片的梗塞体积之和，即为脑的总的梗塞体积。如图1所示。 图1 小鼠脑冠状切片，TTC染色，白色区为梗死灶 略。
1.5 统计学处理 所有原始数据建立数据库，用Excel统计软件，进行分析。