鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因的研究
【摘要】 目的 研究 鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因之间的关系。 方法 用VITEK—2型全自动微生物 分析 仪,检测331株鲍曼不动杆菌和42株多重耐药菌的药敏情况,用PCR方法检测多重耐药菌的耐药基因。结果 鲍曼不动杆菌对21种抗生素的平均耐药率分别为59.8%和62.8%；对头孢曲松、头孢唑啉和头孢替坦的耐药率均为100%； 42株多重耐药菌株（100%）对头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦和氨苄西林完全耐药,且均检测有TEM—1和ampC基因;38株多重耐药菌均检测到TEM—1、ampC、aac（3）和gyrA型基因。结论 鲍曼不动杆菌已成为 医院 重要致病菌, 且多重耐药率很高，与携带的TEM—1、ampC、aac（3）和gyrA型基因有关。
【关键词】 鲍曼不动杆菌; 多重耐药基因; 耐药基因检测 代写论文。
Study on antibiotics resistance and resistant genes of Acinetobacter baumannii。
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XU Jing—feng，XU—Lin ,FAN WEi—hong.General Hospital of BEIjing Military Command, Beijing 100700，China 论文网。
【Abstract】 Objective Objective To study the relationship between antibiotic resistance and resistant gene of Acinetobacter baumannii.Methods The antibiotic resistance and resistant gene was determined by polymerase chain reaction（PCR）and with WHONET5.0 in 331 strains and 42 strains multiresistance of Acinetobacter baumannii.Results The resistance rates of Acinetobacter baumannii to ceftriaxone、cefotetan 、cefazolin were100% and to Imipenem 、 meropenem were23.5%,38.3% respectively .42 strains were identified as multiresistant isolates with presence of TEM—1 and ampC gene;38 strains were identified as multiresistant isolates of TEM—1、ampC、aac（3） and gyrA gene.Conclusion The multiresistance of Acinetobacter baumannii has close relation to concomitant presence of TEM—1、ampC、aac（3） and gyrA gene.
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【Key words】 Acinetobacter baumannii;drug multiresistant;drug resistant gene detection。
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鲍曼不动杆菌已成为医院获得性肺炎的重要致病菌,且很容易在监护病房流行。由于鲍曼不动杆菌在 自然 界的广泛存在及其复杂的耐药机制,对β内酰胺类、氨基糖苷类以及喹诺酮类抗生素已呈现多重耐药，给临床 治疗 其所致感染带来很大困难。为能更好地指导临床选择合适的抗生素，本文对本院2005～2006年住院患者标本分离的331株鲍曼不动杆菌进行药敏分析,并对2006年分离的42株多重耐药鲍曼不动杆菌的基因进行测序和研究,现报告如下。 毕业论文。
1 材料与方法 论文代写。
1.1 菌株来源 331株鲍曼不动杆菌均为我院临床标本中分离并按全国统一操作规程［1］。标本主要包括血液、尿液、痰和其他分泌物。 毕业论文。
1.2 仪器试剂 VITEK—2型全自动微生物分析仪、ID—GN 鉴定卡、AST—GN09药敏卡由法国Bio—Merieux公司生产; VITEK 比浊计（V 1210） 由日本生产；PCR扩增仪为美国PERKIN ELMER公司9600型基因扩增仪；日本三洋MDF型超低温冰箱;德国Hettich公司22R型低温超速离心机;美国水套式恒温培养箱。
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1.3 菌种鉴定、药敏 所有实验菌株分离纯化后按VITEK—2的使用要求配制成菌悬液和稀释液, 分别填充到ID—GN和AST—GN09卡中, 用VITEK—2仪器自动完成细菌的鉴定和药敏实验。 代写论文。
1.4 质控菌株 由卫生部临床检验中心提供的标准菌株大肠埃希菌（ATCC 25922）、铜绿假单胞菌（ATCC 27853）, 药敏质控结果符合NCCLS 药敏质控要求。 毕业论文。
1.5 统计学处理［2］ 细菌耐药性分析用 WHONET5软件进行分析，耐药率显著性差异用SPSS10.0统计软件分析,两组耐药率比较 应用 χ2检验。
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1.6 耐药基因的检测 采用碱裂解法和蛋白酶K法提取被测细菌的质粒和染色体基因,提取方法根据不同引物设立不同PCR条件；以ATCC700603肺炎克雷伯菌和TEM—26型大肠埃希菌分别作SHV型和TEM型阳性对照；其余 ampC、PER—1、OXA—23基因阳性对照均为北京华明公司基因检测室经基因测序后比对的阳性菌株。 论文代写。
1.7 PCR耐药菌基因［3］ 根据GenBank提供的耐药基因，采用Primer软件设计引物（见表1）。反应体系均为25μl,其中缓冲液2.5μl,10mmol/L 4×dNTP 0.5μl,50μmol/上下游引物各1μl,DNA多聚酶0.25μl,DNA模板1μl,超纯水18.75μl 。根据不同引物设立不同PCR反应条件。以ATCC700603肺炎克雷伯菌作SHV型阳性对照，以TEM—26型大肠埃希菌作TEM型阳性对照,产物经电泳,在紫外线下观察结果,并在凝胶上成像。表1 用于检测各种耐药基因的引物（略） 论文网。
2 结果与分析 论文代写。
2.1 鲍曼不动杆菌的临床分布 本文鲍曼不动杆菌均来源于本院的住院病人，其中2006年160株,按标本分为血（6株）、痰（136株）、尿（6株）和其他分泌物12株；2005年171株, 按标本分为尿（5株）、痰（82株）和其他分泌物（89株）。 毕业论文。
2.2 鲍曼不动杆菌对常用5大类21种抗生素的药敏结果 见表2。2006年和2005年鲍曼不动杆菌对21种抗生素的平均耐药率分别为62.8%和59.8%，经χ2检验，差异无显著性（P0.05）。2006年鲍曼不动杆菌对头孢曲松、头孢唑啉和头孢替坦的耐药率均为100%；对头孢他啶、头孢吡肟、头孢呋辛钠和头孢呋辛酯的耐药率分别为57.7%、44.6%、98.0%和98.0%；对β内酰胺和碳青霉烯类如氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南的耐药率分别为100%、48.3%、54.4%、17.7%和75.8%，对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为23.5%和38.3%。2005年鲍曼不动杆菌对头孢曲松和头孢替坦的耐药率均为100%；对头孢他啶、头孢吡肟、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯和头孢唑啉的耐药率分别为43.9%、37.2%、92.1%、92.1%和96.5%；对β内酰胺和碳青霉烯类如氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南的耐药率分别为100%、49.5%、55.2%、15.2%和86.9%，对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为28.9%和34.9%。2006和2005年鲍曼不动杆菌对呋喃妥因的耐药率均为100%，对左旋氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为8.4%、21.5%和75.4%、54.4%。表2 鲍曼不动杆菌对抗生素的耐药率 （略）注：2006与2005年的耐药率比较，※P0.05 论文代写。
2．3 多重耐药菌的药敏结果 从2006年分离的42株多重耐药鲍曼不动杆菌对18种抗生素的药敏结果见表3。42株（100%）菌株对头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦和氨苄西林完全耐药,35株（83%）菌株对氨曲南耐药；25株（60%）菌株对亚胺培南敏感,23株（55%）菌株分别对哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素和美洛培南敏感,17株（40%）菌株对庆大霉素和哌拉西林敏感。 代写论文。