粪钙卫蛋白在溃疡性结肠炎诊断中的价值研究

【摘要】 目的 研究粪钙卫蛋白检测作为一种无创性方法用于诊断溃疡性结肠炎(UC)活动性的价值。方法 UC患者72例，60例经结肠镜检查正常的患者作为对照，留取结肠镜检查后1周内的粪便样本10 g，采用ELISA方法进行粪钙卫蛋白检测，对19例活动期3级患者实施随访，监测粪钙卫蛋白水平变化。结果 ①粪钙卫蛋白水平差异在UC缓解期组和正常对照组之间无统计学意义，活动期组与缓解期组及活动期组和正常对照组之间均有统计学意义(597.2 μg/g vs 7.9 μg/g，6.7μg/g，P0.01)。②活动期1级(109.5 μg/g)、2级(587.9 μg/g)和3级(1331.6 μg/g)两两之间比较差异均有统计学意义(P0.01)。③粪钙卫蛋白水平与UC内镜分级显著相关(r=0.89，P0.01)，19例UC活动期3级患者经治疗后至缓解期，粪钙卫蛋白水平显著下降，其治疗前后相比差异有统计学意义(1378.5 μg/g vs 8.7 μg/g，P0.01)。结论 粪钙卫蛋白水平可以较准确地反映UC患者所处不同时期(活动期或缓解期)以及活动期的不同严重程度(活动期1.2.3级)，能较好地应用于临床诊断、观察疗效并指导用药。

【关键词】 钙卫蛋白;溃疡性结肠炎;ELISA。

[Abstract] Objective To research the value of fecal calprotectin as a non—invasive marker of disease activity in ulcerative colitis (UC).Methods We recruited 60 control patients and 72 patients with UC. A11 the patients were asked to collect 10g fecal samples in 1 wk after colonoscopy. An ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) was used to determine fecal calprotectin. 19 patients whose UC activity at 3 grade after medical therepy were conduct follow—up visits, to guide clinical therapy and observe effects based by the level of fecal calprotectin.Results There was no significant difference in fecal calprotectin level between the inactive UC and control groups. There are significant difference in fecal calprotectin level between patients with active and inactive UC(597.2μg/g vs 7.9μg/g， P。

[Key words] Calprotectin;Ulcerative colitis;ELISA。

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是常见的慢性炎症性肠道疾病，其病因与发病机制尚不十分清楚[1]，普遍认为与机体免疫应答、肠黏膜免疫识别失调[2]及个体遗传易感性有关。当前诊断UC活动性主要依靠结肠镜检查，有研究认为UC内镜下的活动性可反映疾病严重性[3,4]，但患者依从性较差。外周血WBC，PLT, CRP, IgG，ESR等虽可用于诊断UC的活动性，但敏感度不高。钙卫蛋白(calprotectin)是一种杂合性的钙结合蛋白，具有耐热性和抗蛋白酶活性，在肠腔和外界环境中可长期保持相对稳定而不被酶和细菌所破坏[5]，其主要生物学功能包括：抗微生物活性，免疫调节作用;参与细胞信号传递;抗增殖和诱导细胞凋亡，炎症反应中调节蛋白等。它是中性粒细胞和活化巨嗜细胞胞质中的重要蛋白质，可作为一种炎性标志物[6]。国外资料研究表明，粪便中钙卫蛋白的稳定性要好于其它粪便生物标记物，其浓度在UC活动期显著增加[7]。本试验中，我们检测UC患者不同时期的粪钙卫蛋白含量并与血液指标WBC，PLT, CRP, IgG，ESR相比较，研究是否可把它作为溃疡性结肠炎的诊断指标、疗效观察和治疗方案调整的依据。

1 材料和方法。

1.1 材料2007年1月至2008年9月符合2000年成都会议标准[8]确诊的UC患者72例，男35例，女37例，平均年龄41(25～69)岁。随访活动期3级患者19例至缓解期后均重复结肠镜检查和粪便标本采集，一共进行结肠镜检查91次，组织活检91份，采集粪便标本91份。选用肠镜及活检正常的60例患者为对照组。肝、肾功能及血液指标WBC，PLT, CRP, IgG，ESR均正常，男23例，女37例，平均年龄42(18～70)岁。入选者均无明显上消化道症状及胃和小肠疾患，无严重心、肺、肝、胰、肾和神经、精神疾病，近1个月内未曾应用过糖皮质激素和免疫抑制剂，并排除孕妇、药瘾者、长期使用非甾体抗炎药及质子泵抑制剂者[9]、类风湿性关节炎及系统性红斑狼疮患者、酗酒者等。UC患者依据Truelove内镜分级标准被分为缓解期、活动1，2，3级，留取患者肠镜检查1周内的粪便，2 h内送至医院，密封后置于—20℃保存，以备钙卫蛋白检测。所有入选者在肠镜检查当日行肝、肾功能及WBC，PET,CRP,IgG，ESR检测，肠镜检查时均取活检，病理诊断采用TrueloveWiffs标准[10]，人粪钙卫蛋白检测ELISA试剂盒购自芬兰Hycult公司，酶标仪为USA BioRad 550型。

1.2 方法 将留存粪便在室温解冻后，用取样环取约50～150 mg，放入螺口试管中一并称其质量，计算出粪便的净含量，按照质量/容积(kg/L)=1∶50的比例加入萃取液，充分震荡20 min混匀后取1 mL匀浆离心10000 g 20 min，取上清液0.5 mL留存备用，—20℃保存,酶联免疫反应严格按照人粪钙卫蛋白检测ELISA试剂盒说明书进行，将钙卫蛋白提取液室温解冻，以1∶10比例稀释，常规ELISA操作程序(双抗体夹心法)。将酶标仪设置为450 nm进行测定，标准品包括7个质量浓度(100，50，25，12.5，6.25，3.13，1.56 μg/L)，最高浓度标准液的光密度值为2.373，以1∶10比例稀释的标本若超出标准曲线范围没有被测出，则需进一步扩大稀释比例直至测出为止。

1.3 统计学处理 计算样本的中位数和四分位间距。两组间比较用MannWhitney U检验，相关系数用Spearman相关分析计算并进行检验。P0.05为差异有统计学意义。

2 结 果。

2.1 UC活动性与粪钙卫蛋白、血IgG和CRP 活动期粪钙卫蛋白水平显著高于缓解期和正常对照组(P0.01)(表1)，缓解期和对照组之间差异无统计学意义(P0.05)，活动期各级之间差异均有统计学义。19例活动期3级患者治疗后至缓解期，粪钙卫蛋白水平显著下降，其治疗前后差异有统计学意义(1378.5 μg/g vs 8.7 μg/g，P0.01)。粪钙卫蛋白与肠镜分级显著相关(r=0.89，P0.01)。缓解期IgG，CRP与对照组之间差异无统计学意义(0.05)，活动期IgG和CRP水平高于缓解期和正常对照组(P0.01)。IgG活动期各级之间差异均有统计学意义，CRP活动期2、3级之间差异无统计学意义，IgG，CRP与肠镜分级相关(r=0.97，0.96，P0.01，表2)。

2.2 UC活动性与血PLT,ESR和WBC 缓解期PLT,ESR，WBC和对照组之间差异无统计学意义(P0.05)，活动期PLT，ESR，WBC水平高于缓解期和正常对照组(P0.01)，PLT活动期各级之间差异均有统计学意义，ESR活动期1、2级之间差异无统计学意义，WBC活动期各级之间差异均无统计学意义，PLT，ESR，WBC与肠镜分级相关(r=0.98，0.99，0.97，P0.01)(表3)。表1 粪钙卫蛋白测定结果表2 UC患者粪钙卫蛋白、血IgG，CRP的检测结果表3 UC患者血WBC，PLT, ESR检测结果。

3 讨 论。

钙卫蛋白最早在1980年从中性粒细胞和单核细胞中分离出来，广泛分布于人体组织、体液及细胞中，是一种重要的炎症反应性蛋白。UC为结肠慢性炎症，故粪便炎性标志物比血清标志物能更敏感地反映肠道炎症程度。粪钙卫蛋白是稳定而又活化的炎性生物标记物，故可以用来判断UC的活动性。在本实验中，患者肠道炎症程度按内镜分级标准进行分级。粪钙卫蛋白含量在活动期为597.2 μg/g，缓解期为7.9 μg/g，对照组为6.7 μg/g，这与国外研究基本吻合[11]，粪钙卫蛋白检测可准确地诊断UC的活动期和缓解期，并能反映病情动态变化。

目前，血液指标WBC、PLT、CRP、IgG及ESR常用于UC活动性的诊断。我们发现，活动期CRP水平高于缓解期和正常对照，和以往研究结果相近[12]，诊断UC活动性的敏感度为64%，诊断UC活动期2，3级的敏感度优于1级。活动期IgG水平与缓解期和正常对照均有差异，提示活动期UC患者体内免疫功能失调紊乱，诊断UC活动性的敏感度为46.6%，诊断UC活动期1，2级的敏感度较差。活动期PLT水平高于缓解期和正常对照，与Chiarantini [13]等的研究结果相一致，证明活动期UC患者体内血液呈高凝状态，易发生血管栓塞，诊断UC活动性的敏感度为45.3%，对活动期3级的敏感度较好。活动期ESR水平与缓解期和正常对照均有差异，国外也有相同报道[14]，诊断UC活动性的敏感度为24%，对活动期1，2，3级的敏感度均不高，但相对于3级较敏感。活动期WBC水平与缓解期和正常对照存在差异[15]，诊断UC活动性的敏感度为13.3%，对活动期1，2，3级敏感度均差。上述血液指标易受全身因素的影响，对肠道病变的敏感度较低，升高时常见于重症患者，故诊断UC活动性的价值不高。与血液指标相比，粪钙卫蛋白在UC活动期显著高于缓解期和正常对照，活动期各级之间差异也均有统计学意义，与UC内镜分级标准的相关性极高[16]，明显高于上述各项指标;诊断UC活动性的敏感度为98.7%，对UC活动期各级均高度敏感，经χ2检验，粪钙卫蛋白诊断UC活动性的敏感度与其他血液指标差异均有统计学意义(P0.01)，显著高于其他指标。