沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定
作者：吴文倩 刘银芳 张娟 顾振纶 郭次仪 刘春宇。
【摘要】 目的建立从沙苑子中制备沙苑子苷A对照品的方法。方法采用大孔树脂富集、聚酰胺柱色谱、硅胶柱色谱和重结晶方法对沙苑子80％乙醇提取物进行分离纯化，通过MS、IR、UV、1H—NMR和13C—NMR进行结构鉴定，通过TLC和HPLC对对照品进行纯度检测。结果从沙苑子中分离、纯化出沙苑子苷A对照品，质量分数99.0％。结论该方法制备的沙苑子苷A对照品符合中药化学对照品的相关要求，可作为沙苑子药材及其制剂质量控制，以及中药药效物质基础研究用的化学对照品。
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.干燥成熟的种子［1］，能温补肝肾、固精、缩尿、明目，用于治疗肾虚腰痛，遗精早泄，白浊带下，小便余沥，眩晕目昏；始载于《图经本草》，名为白蒺藜。 沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸等。黄酮类成分是沙苑子的主要有效成分，具有许多药理活性。近年来研究认为沙苑子总黄酮可保护大鼠重要器官免受运动损伤，明显提高大鼠的运动能力［2］，抑制肝纤维化形成［3］，抗肿瘤［4～6］，此外对SHR和RHR［7～8］有明显的降压作用。但有关沙苑子的质量标准中，由于缺少化学对照品，尚无沙苑子黄酮含量控制指标，2005年版的《中国药典》中沙苑子的质量标准也仅有性状、显微、荧光检测等内容。为了进一步研究和完善沙苑子的质量标准，迫切需要研制一种或多种对照品。沙苑子苷A是沙苑子黄酮的主要特征性成分，且在沙苑子中的含量较高，也是沙苑子保肝抗肝纤维化的主要有效成分之一。本文从沙苑子中提取、分离和纯化沙苑子苷A，制备沙苑子苷A对照品，为制定和完善沙苑子及其制剂的质量标准提供沙苑子苷A对照品。
1 仪器与材料 美国Nicolet公司FT—IR Magna—550红外光谱仪 (KBr压片)；美国VARIAN公司INVOA—400超导核磁共振谱仪核磁共振仪；美国ABI Qtrap2000液相色谱－质谱仪；英国MICROMASS GCT OA—TOF高分辨质谱仪；惠普7530—GUV/VIS紫外光谱仪；岛津LC—20A高效液相色谱议，SPD—M20A二极管阵列检测器，岛津1.22 SP1色谱工作站；WC—1，显微熔点测定仪。 沙苑子A complatus R.Br.苏州雷允上药业集团公司提供, 产地为陕西渭南，由苏州大学刘春宇教授鉴定为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.的种子；黄酮吸附树脂ZTC—5型（天津正天澄清技术有限公司）；聚酰胺（100—200目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；硅胶（青岛海洋化工厂），其它化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果。
2.1 沙苑子苷A的制备工艺取沙苑子粗粉3 kg，用10倍量石油醚回流脱脂，脱脂药粉挥干，用10倍量的80%乙醇提取2次，1.5 h/次,过滤，合并滤液，回收溶剂后，加水稀释至3 000 ml，通过ZTC—5黄酮大孔吸附树脂，依次用水及50%乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱部位，回收溶剂，干燥，即为沙苑子总黄酮（40 g）。取总黄酮加水溶解，过滤，经聚酰胺柱层析，用水及不同浓度乙醇梯度洗脱，收集水洗脱部位，上硅胶柱，用醋酸乙酯∶甲醇梯度洗脱，醋酸乙酯∶甲醇(10∶2)洗脱部位析出沙苑子苷A结晶，甲醇进行多次重结晶，得淡黄色针状结晶（700 mg）。
2.2 对照品的理化性质及结构鉴定结晶经显微熔点测定仪测定，mp279～280℃（未校正），盐酸－镁粉反应呈樱红色；酸水解后溶液遇斐林试剂呈阳性反应，三氯化铝反应呈黄色；氧氯化锆－枸缘酸反应鲜黄色消退，说明有5位羟基无3位游离羟基。提示为黄酮苷类化合物。光谱分析结果如下：UV（nm）MeoH：266.2，333.8；IRKBRMAX 3 371.8（γOH），1 655.0（γC＝O），1 597.2，1 500.7（Ar）：1 253.8(Ar—O—C),1 076.4,1 022(C—O)；EI—MS m/e :(苷元)300（M－162＋H），271，121；Mariner Mass (m/2)625.18 (M＋624+1);463.12(M＋—162+H);274.27;206.99说明该化合物含两个六碳糖。13C—NMR: （见表1）。1H—NMR:12.569(1H,s,5—OH),8.169 (2H,d,J=9 Hz,2′,6′—H,7.16(2H, d,J=9 Hz, 3′,5′—H),6.80(1H,d,J=1 Hz,8—H),6.41(1H,d,J=1 Hz,6—H),5.50(1H, d, J=7 Hz, glc1″—H),5.39(1H,d,J=7 Hz,glc1″′ —H),3.87(3H, s,7—OCH3)。根据以上数据分析，与文献［2］报道的沙苑子苷A一致。见表1及图1～3。表1 沙苑子苷AC—NMR数据（略）。