武陵山血红栓菌深层发酵研究

作者：陈今朝， 王新惠， 秦家顺。

【摘要】 目的研究武陵山血红栓菌菌丝体液体培养的最适培养基及培养条件。方法利用液体深层培养法筛选血红栓菌菌丝体的最适培养基和最适培养条件。结果血红栓菌菌丝体液体培养的最适培养基为葡萄糖3.0%，牛肉膏0.75%，磷酸二氢钾0.20%，硫酸镁0.05%，维生素B1 0.01 mg/ml；最适培养条件为培养液初始pH 6.0，装量75 ml/250 ml三角瓶装，摇瓶速度180 r/min，培养温度25℃，发酵周期7 d。结论用深层培养法生产武陵山血红栓菌菌丝体，菌丝体的产量最大为1 276.7 mg/ml。

【关键词】 血红栓菌； 深层发酵； 菌丝体。

血红栓菌Trametes sanguinea (L.:Fr.) Lloyd隶属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、多孔菌科、栓菌属［1］。血红栓菌夏秋季生于栎、槭、杨、柳等阔叶树和松、杉等针叶树枯倒木上群生或叠生；在我国主要分布于云南、贵州、广东、四川和重庆等省市［2］。血红栓菌具有生肌、行气血、化痰、除风湿、止痒、顺气、止血；有抑制癌细胞作用，对小鼠肉瘤180的抑制率为90%。血红栓菌子实体还含有对革兰氏阴、阳性菌有抑制作用的多孔蕈素。此外，还用于消炎，用火烧研粉敷于疮伤处［1,3］。 　　国内外文献对普通灵芝属类木质菌研究较多，对血红栓菌的研究报道较少，对它的菌丝体发酵几乎没有相关的文献报道。在血红栓菌菌丝体成熟后就形成木质化子实体，不易加工。对血红栓的菌丝体发酵工艺条件研究，可以为血红栓菌菌丝体作为原料生产医药产品提供科学依据。

1 材料。

1.1 菌种血红栓菌，200808采集自武陵山彭水县桑柘乡野生血红栓菌子实体，经组织分离得到纯菌种。

1.2 培养基碳源、氮源基础培养基（磷酸二氢钾0.10%，硫酸镁0.05%，维生素B1 0.01 mg/ml）；无机盐基础培养基（葡萄糖2.0%，牛肉膏0.50%，维生素B1 0.01 mg/ml）［4］。

2 方法。

2.1 液体发酵将10%种子液接入基础培养基中，培养基装量为75 ml /250 ml三角瓶，25℃，180 r/min振荡培养7 d［5］。

2.2 菌丝体产量测定方法培养得到的菌丝体经离心、过滤、用纯净水洗涤3次，于60℃干燥箱内烘干至恒重，用电子天平称重。

3 结果。

3.1 发酵培养基的筛选。

3.1.1 碳源对菌丝体生长的影响将2.0%葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉和玉米粉分别加入基础培养基中进行试验，以基础培养基为对照，结果如图1。菌丝体产量以葡萄糖最大为 570.3 mg/100 ml，比对照增加72.6%；蔗糖最小为290.1 mg/100 ml，比对照增加12.2%。碳源对血红栓菌菌丝体生长的影响大小依次为：葡萄糖乳糖玉米粉可溶性淀粉基础培基蔗糖。

3.1.2 氮源对菌丝体生长的影响在基础培养基中分别加入0.50%牛肉膏、黄豆粉、蛋白胨、尿素和硫酸铵进行试验，以基础培养基为对照，结果如图2。菌丝体产量以牛肉膏最大为583.2 mg/100 ml，比对照增加83.1%；尿素最差为15.5 mg/100 ml，比对照减少95.1%。氮源对血红栓菌菌丝体生长的影响大小依次为：牛肉膏黄豆粉 蛋白胨基础培养基 硫酸铵尿素。

3.1.3 无机盐对菌丝体生长的影响将0.05%硫酸钾、硫酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸锰分别加入基础培养基中进行试验，以基础培养基为对照，结果如图3。从图3可见，菌丝体产量以磷酸二氢钾最高为582.4 mg/100 ml，比对照增加65.6%；硫酸镁列其次为561.7 mg/100 ml，比对照增加59.7%；硫酸钙最低为313.0 mg/100 ml，比对照减少11.0%。无机盐对血红栓菌菌丝体生长的影响大小依次为：磷酸二氢钾硫酸镁 硫酸锰 硫酸钾 基础培养基硫酸钙。