浸润性乳腺癌组织中Ecadherin和CD44v6表达及DNA倍体分析
作者：马春梅 蒋敏 李敏 刘伟 朱艳芳 陈永林。
【摘要】 目的： 探讨浸润性乳腺癌组织中Ecadherin（Ecad）和CD44v6的表达及DNA倍体，并分析其临床病理学意义. 方法： 应用免疫组化SP法、组织化学Feulgen染色及图像分析技术检测103例浸润性乳腺癌组织中Ecad和CD44v6蛋白的表达及DNA倍体. 结果： 浸润性乳腺癌Ecad阳性表达率为35.0％(36/103)，Ecad表达与组织学分级、组织浸润程度、腋窝淋巴结转移、复发、远处转移密切相关（P＜0.05）. CD44v6阳性表达率为76.7％(78/103)，其表达与组织学分级、组织浸润程度、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、复发、远处转移密切相关（P＜0.05）. Ecad阴性和CD44v6阳性表达的浸润性乳腺癌多为异倍体癌；Ecad阳性和CD44v6阴性表达的多为2倍体癌（P＜0.05）. 结论： Ecad的低表达与CD44v6的高表达可能参与乳腺癌的侵袭与转移；DNA异倍体可作为对乳腺癌预后的判断指标之一.
【关键词】 乳腺肿瘤 E钙粘着糖蛋白 CD44v6 免疫组织化学 异倍体。
0引言。
浸润和远处转移是导致乳腺癌临床治疗失败的主要原因. 因此，阐明乳腺癌的浸润、转移机制显得尤为重要. 随着对肿瘤发展分子机制的深入研究，发现黏附分子Ecadherin(Ecad)和CD44v6蛋白的表达与肿瘤浸润、转移密切相关［1］. 恶性肿瘤的重要特征之一就是细胞无限制的生长，细胞DNA含量及分布的异常是其生长的物质基础. 所以细胞DNA含量的测定对判断肿瘤性质、预后具有重要意义［2］. 我们通过观察Ecad和CD44v6在浸润性乳腺癌的表达，以探讨二者与乳腺癌各病理、临床指标间的关系及与DNA倍体的相关性，为判断乳腺癌进展及预后提供参考指标.
1材料和方法。
1.1材料兰州大学第一医院病理科手术切除女性乳腺癌标本103例，年龄23～76（平均48.2）岁. 依据WHO标准进行组织学分型：浸润性导管癌72例，管内癌为主的浸润性导管癌11例，浸润性小叶癌7例，髓样癌13例. 56例有随访记录，其中年龄≤50岁21例，＞50岁35例；肿瘤直径≤3cm者12例，＞3cm者44例；无腋窝淋巴结转移患者11例，1～3个转移患者16例，＞3个转移者29例；局部复发14例，远处转移20例. SP试剂盒、鼠抗人Ecad和CD44v6单克隆抗体均购自福州迈新生物技术公司.
1.2方法。
1.2.1 Ecad和CD44v6表达标本经40 g/L甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续4 μm薄切片，分别作HE、免疫组化染色及Feulgen DNA染色. 免疫组织化学染色采用SP法，操作步骤按说明书进行. 以已知阳性切片作阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗. 按照BloomRichardson标准进行组织学分级；组织浸润程度按肿瘤边界清楚度进行分级；无腋窝淋巴结转移为（—）组，1～3个腋窝淋巴结转移为（+）组，＞3个为（）组；CD44v6以细胞质/膜出现棕色颗粒为阳性细胞，Ecad计细胞膜棕染为阳性细胞，根据阳性细胞百分率和染色深浅度的乘积分级：阴性（—）、阳性（+）、强阳性（）.
1.2.2DNA倍体分析DNA倍体分析采用Feulgen染色，依据欧洲分析病理学会（ESACP）1995年提出的标准化方案改进，石蜡切片脱蜡、梯度乙醇入水后用1 mol/L盐酸水溶液于60℃处理8 min，后入Schiff液在室温下暗处反应45 min，亚硫酸水溶液洗涤1 min×3次，流水冲洗，常规脱水封片. 采用Video Pro32图像分析系统对Feulgen染色切片的癌细胞进行DNA含量检测，每例检测100个癌细胞核积分吸光度（IA）值. 同时，检测同一切片30个淋巴细胞的IA，以淋巴细胞的平均（P50）IA值作为二倍体（2C）的对照值. 2C（二倍体）＜1.25×P50，3～4C≥（1.25～2.25）×P50，5C≥（2.25～2.75）×P50. ＞5C的细胞作为异倍体细胞. DNA含量用DNA指数（DI）表示，DI=肿瘤细胞核IA均值/淋巴细胞核IA均值. 二倍体DI=0.90～1.10，大于或小于此值为异倍体. DI值不在0.90～1.10范围，并且有＞5C的细胞，作为判定异倍体的标准.
统计学处理: 应用SPSS10.0统计软件对资料进行统计学处理，组间均数比较用t检验，率的比较用χ2检验. 以P＜0.05为差别有统计学意义.