三七总皂苷的减压内部沸腾提取及树脂吸附分离
作者：李春玲，翁艳英，赵钟兴，韦藤幼，童张法。
【摘要】 目的提高三七总皂苷的收率及纯度。方法三七粉末经少量70%乙醇解吸后，以水为溶剂在45℃及—0.084 MPa下进行减压内部沸腾提取，提取两次，4 min/次，提取液经浓缩后，直接采用大孔树脂进行吸附分离。结果得到的浸膏中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及Rg1三者含量之和达到70.0％，得率达到5.4％，大大高于传统方法。结论减压内部沸腾提取与大孔树脂吸附分离相结合的工艺具有提取速度快、无需水沉或醇沉工序、收率高及质量好等特点，具有良好的应用前景。
Abstract：ObjectiveTo increase the yield and the purity of total saponin of Panax notoginseng.MethodsThis study applied decompressive internal boiling method for the extraction .In this method, Panax notoginseng powders were desorbed by the 70 percent ethanol at first, and then were extracted twice in 45℃ and —0.084Mpa by the water solvent, each time 4min. After condensed the solution was directly purified with macroporous resin.ResultsThe total contents of notoginsenoside R1 and Ginsenoside Rb1, Rg1 from extract could get to 70.0％,the yield was 5.4%, and these two results were much higher than those from traditional method .ConclusionThe method of decompressive internal boiling extraction combined with macroporous resins absorption separation has many features such as fast extraction, high yield and good quality, without water precipitation or alcohol precipitation etc.
Key words：Panax notoginseng； Notoginseng saponin； Extraction； Decompression； Internal boiling 三七主要产于云南、广西等地［1］，其总皂苷具散淤止血、活血化淤、消肿止痛等功效。为了避免三七根中淀粉糊化，目前主要采用醇提［2］和提取液水沉、大孔树脂纯化的工艺［3］，乙醇消耗量大，有效成分损失多。文献［4］提出采用内部沸腾法提取植物有效成分。为了降低提取温度，文献［5］提出了减压内部沸腾的方法。本文把减压内部沸腾提取与大孔树脂吸附分离相结合，对三七总皂苷进行了提取与分离。结果表明，在45℃提取得到透明干净的上柱液，经柱纯化后得到总皂苷含量为70.0％,得率为5.4％的产品，与传统法相比，生产效率及产品质量都有明显的提高。
1 器材。
1.1 材料三七（产地云南）。人参皂苷Rg1和Rb1及三七皂苷R1对照品（中国药品生物制品检定所，110703—200322）；95%乙醇、甲醇(分析纯)；乙腈(色谱纯)；大孔吸附树脂HPD—400（河北沧州宝恩化工有限公司）。
1.2 设备PC2501紫外分光光度计、RE—52AA型旋转蒸发器、FZ102微型植物粉碎机、精密恒温浴槽、电热真空干燥箱、液相色谱Waters2695（美国Waters公司）。
2 方法。
2.1 提取减压内部沸腾法：取10.00 g三七粉碎物料于三角瓶中，加入一定量浓度乙醇溶液作为解吸剂使之润湿均匀，25℃静置解吸30 min时间（除了第2次提取用的是湿物料外，两次提取的解吸操作均相同）；待解吸充分后，加入一定温度热水，同时迅速降低三角瓶中气压，使物料内部有少量气泡溢出，实现内部沸腾强化提取，提取两次，合并滤液，分析。 传统醇提：取10.00 g三七粉碎物料，放于250 ml圆底烧瓶中，加入100 ml 70%的乙醇溶液提取剂沸腾回流提取两次，提取1.5 h/次，合并滤液，分析。
2.2 减压内部沸腾法提取液的大孔树脂纯化吸附泄漏曲线：称取预处理好的HPD—400树脂15 g，湿法装填于直径10 mm，高300 mm的吸附柱。分别取300 ml浓缩到8 mg/ml，4 mg/ml和2 mg/ml的三七提取液以每1 ml/min的速度上柱，每10 ml收集1次流出液，分析流出液，绘制泄漏曲线。 洗脱剂浓度选择：将吸附三七提取液的树脂先用蒸馏水洗去除杂质，再分别用100 ml 50%，60%，70%，80%，90%的乙醇洗脱，将流出液进行分析，确定最佳洗脱剂浓度。
2.3 传统提取液的大孔树脂纯化提取液的预处理：把提取液浓缩到4 mg/ml，过滤去掉沉淀物，得到上柱液。 吸附纯化：在直径10 mm，高300 mm的吸附柱中，装入预处理好的HPD—400树脂15 g，然后以每1 ml/min的速度上柱140 ml，然后分别用蒸馏水洗涤和100 ml 80%乙醇洗脱，洗脱液经浓缩后，干燥得到产品。
2.4 高效液相色谱分析［6］。
2.4.1 色谱条件色谱柱为C18(4.6 mm×250 mm)；柱温为室温；流动相为乙腈与水梯度洗脱；流速1 ml/min；检测波长205 nm；检测灵敏度1AUFS。
2.4.2 对照品溶液的制备精密称取R1，Rg1，Rb1各10.00 mg分别于3个10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。使其制成各1.00 mg/ml的标准溶液。各取适量配成R1，Rg1，Rb1混合标准液。
2.4.3 线性关系分别精密吸取人参皂苷Rg1，Rb1，R1混合标准液5 ，10 ，20 ，30 ，40 μl注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标(Y),对照品进样量为横坐标(X)进行线性回归：人参皂苷Rg1和Rb1及三七皂苷R1回归方程分别为Y =186X —18947 （r = 0.999 8），Y = 178X —24 404 （r = 0.999 9）及Y =180X +413（r= 0.999 8），测量的精密度RSD分别为1.2%，0.65%及0.62%。
2.5 得率的定义得率（Yield）＝提取得到Rg1，Rb1，R1质量之和/原料质量×100％。