HPLC法对冬虫夏草和蛹虫草中核苷酸类成分的研讨策略

何帅 　　（临清市食品药品监督管理局 山东 临清 252600） 　　摘要：采用反相高效液相色谱法，以SHIMADZU C18（150mm4.6mm I.D. ，5m）为色谱柱；以缓冲盐（KH2PO4—H3PO4）—甲醇（99.5：0.5）（pH3.75）体系为流动相，在流速0.8mL/min，柱温26C，检测波长260nm，进样量20L的条件下对上述两个样品中5—核苷酸的含量进行了分析测定。结论该法快速简便，重现性好，能有效的测定样品中核苷酸类成分。 　　关键词：5—核苷酸；冬虫夏草；蛹虫草菌丝体；高效液相色谱 　　【中图分类号】R914.1 【文献标识码】A 【文章编号】1002— 　　3763（2014）02—0003—01 　　核酸是生命科学中重要的复杂的生物大分子。核酸组成的分析促进了生物化学的迅速发展，因此越来越引起人们的重视[专业提供代写论文和论文代写服务，欢迎您的光临]。现代药理研究表明，冬虫夏草及其活性成分对免疫系统有双向调节作用，对肾脏和肝脏疾病有治疗作用，并有抗肿瘤、抗衰老和抗应激的活性[1]。蛹虫草是一种与冬虫夏草药理作用相近的药材，具有增强机体免疫力及抑制肿瘤生长的作用。在含量上有些成分含量高于冬虫夏草。 论文网 　　本文主要测定冬虫夏草、蛹虫草菌丝体中的5—核苷酸。应用反相高效液相色谱系统测定上述两种样品中的核苷酸类物质。 　　1材料与方法 　　色谱甲醇（山东禹王试剂厂）、磷酸盐缓冲液（pH=3.75，浓度0.2mol？L—1）、超纯水；对照品5—AMP（5—腺苷酸）、5—CMP（5—胞苷酸）、5—GMP（5—鸟苷酸）、5—UMP（5—尿苷酸）、5—IMP（5—嘌呤核苷酸）、5—XMP（5—黄嘌呤核苷酸）均购自中国药品生物制品检定所。 　　分别取6种标准品，精密称定后，置于容量瓶，定容，然后稀释成一定浓度的对照品溶液。 　　混合标准品的配制：5—UMP、5—GMP、5—AMP、5—CMP、5—IMP、5—XMP浓度分别为0.0210，0.0152，0.0152，0.0160，0.0260和0.0194gL—1。 　　安捷伦高效液相色谱仪（Agilent 1100 HPLC， America）；色谱柱：SHIMADZU C18（150mm4.6mm I.D.， 5m）；流动相：缓冲盐（KH2PO4—H3PO4）—甲醇（99.5：0.5）（pH3.75）体系；流速：0.8mL/min；柱温：26℃；检测波长：260nm；进样量：20L。 　　样品：冬虫夏草（购自西藏自治区药材公司）；蛹虫草菌丝体（北京大学生命学院菌种室提供）。 思想汇报 /sixianghuibao/ 　　样品的制备：分别称取上述四种样品各0.500g，加10mL水，超声粉碎，在4200rmin—1下离心20min。取上清液，用0.45m滤膜过滤。 　　超声粉碎条件：JY92—Ⅱ型超声波细胞粉碎机，超声5s钟，间歇5s，工作60次，重复1次，共计20 min。 　　用标准加入法对对照品中各色谱组分进行色谱分析，六种组分依次为： 5—CMP；5—UMP；5—GMP；5—IMP；5—XMP；5—AMP。 　　2 方法学考察 　　精密吸取混合标准溶液2，4，6，8和10mL，分别置于50mL量瓶中，用超纯水定容。在上述色谱条件下进样20L，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，由标准曲线可知：六种对照品分别在8.2～42.2，6.0～31.5，5.8～30.9，6.2～33.0，7.1～38.4和7.5～41.5mgL—1范围内具有良好的线性关系，经日内两次重复，相关系数均在0.998以上。 　　表明此标准混合工作液，在冷藏的条件下，至少4日内其浓度基本不变。 　　称对照品一份，按上述方法制备供试液，于相同色谱条件及进样量下测定峰面积，一日内每4h测定1次，连续测定5次。将每个对照品当日测定的5次的峰面积的平均值，及各次的峰面积积分结果进行统计，RSD分别为2.34%，2.51%，2.48%，2.08%，2.10%和2.02%（n=5）。

论文网 　　称取对照品5份，每份0.1g，按对照品制备方法制备供试液，分别在相同色谱条件和进样量下测定峰面积，将每个对照品测定的5次的峰面积的平均值，及各次的峰面积积分结果进行统计， RSD分别为2.09%，2.23%，2.10%，2.52%，2.05%和2.11%（n=5）。 　　结果表明样品供试品溶液在8h内基本稳定。 　　2.1冬虫夏草 　　取约0.25g已知含量的样品，精密称定。精密加入已知量的对照品适量，按样品条件进样测定。 　　取已经处[专业提供代写论文和论文代写服务，欢迎您的光临]理好的样品于高效液相色谱仪配备的样品瓶中，按最佳色谱条件进样。 　　用标准加入法对各核苷酸类组分进行定性，然后用标准曲线法计算样品中所含各种核苷酸的含量分别为：5—UMP 886.0gg—1、5—GMP 11.1gg—1、5—IMP 1640.4gg—1、 5—AMP 153.7gg—1。 　　2.2蛹虫草菌丝体 　　取约0.25g已知含量的样品，精密称定。精密加入已知量的对照品适量，按样品条件进样测定。 　　用标准加入法对各核苷酸类组分进行定性，用标准曲线法计算样品中所含各种核苷酸的含量分别为： 代写论文 　　5—CMP 173.0gg—1、 5—UMP 824.9gg—1、5—GMP 92.9gg—1、5—IMP 2114.0gg—1、5—XMP 79.6gg—1、5—AMP 231.4gg—1。 　　3 结论 　　经测定冬虫夏草有4种核苷酸，每克含量为：5—UMP 886.0g、5—GMP 11.1g、5—IMP 1640.4g、 5—AMP 153.7g ；蛹虫草菌丝体有6种核苷酸，每克含量为：5—CMP 173.0g、 5—UMP 824.9g、5—GMP 92.9g、5—IMP 2114.0 g、5—XMP 79.6 g、5—AMP231.4 g 。 　　冬虫夏草和蛹虫草菌丝体中5—UMP 、5—IMP 含量均较高。 　　本文用反相高效液相色谱法对两种样品中的核苷酸类物质进行定性、定量分析，快速、简便、重现性好，为进一步开发利用虫草等珍贵药材提供了理论数据。 　　参考文献： 毕业论文。