苎麻叶中总酚酸提取工艺的正交设计优化
作者：周媛，邹坤，汪鋆植，朱静靖，彭元丽，刘闯。
【摘要】 目的研究苎麻叶中总酚酸提取工艺。方法设计不同的工艺路线，在单因素实验基础上采用正交设计优化，采用改进的Folin—Ciocalteu 比色法测定总酚酸含量，检测波长为755 nm。结果适宜的总酚酸提取工艺为用12倍量80%浓度乙醇, 70 ℃提取3次,2 h/次,水稀释体积为700 ml, 碱化pH值为10。 测得苎麻叶80%乙醇提取物中总酚酸粗膏得率为19.9%，总酚酸含量为0.214%。结论该工艺步骤简单，成本较低，提取率高，适合于苎麻叶中总酚酸的工业化提取。
Abstract：ObjectiveTo design different extraction and separation technology of total polyphenol in Boehmeria nivea (Linn.)Gaudich.. MethodsThe orthogonal test method was adopted to research the effect of various factors. The samples were determined by spectrophotometer, the detection wavelength was 755 nm. ResultsThe optimum extraction conditions were as follows:extraction three times with 80% alcohol ,extraction time 2 h, 12 times the volume of the alcohol at 70 ℃,the volume 700 ml with water, the pH 10 with basification. The crudely yielding rate of total polyphenol was about 19.9% and the content of total polyphenol was 0.212% with the technology. ConclusionThe technology is suitable for industrial production.
Key words： Boehmeria nivea； Total polyphenol； Orthogonal test； Extraction technology。
苎麻叶系荨麻科（Urticaceae）植物苎麻Boehmeria nivea (Linn.)Gaudich.的干燥叶。苎麻为多年生宿根性草本植物，又名家苎麻、白麻、圆麻。其根具有清热、止血、解毒散瘀功效［1］。我国的苎麻产量约占全世界苎麻产量的90%以上，其茎皮主要作为优良的纺织原料。仅以2005年为例，我国苎麻纺织工业苎麻耗量为177 250 t，出口创汇15 597万美元［2］。苎麻叶作为苎麻纺织工业的废弃物资源极其丰富，苎麻叶片约占植株重量的40 %左右［3］。多年来，苎麻根已成为临床常用止血药，而对苎麻叶的研究尚不深入，但根据已有研究资料表明，叶中含有与根相同的成分绿原酸，此外还含有原儿茶酸、野漆树苷、芸香苷等酚酸类等抗氧化活性物质［4～7］，因此有望作为根的代用品，并在抗衰老等方面有进一步的开发和利用的价值［8］。
本实验以苎麻叶为原料，选择了不同的工艺方法提取苎麻叶中的总酚酸，并通过正交实验优化工艺条件，以Folin—Ciocaileu比色法测定总酚酸粗浸膏中的总酚酸含量，为苎麻叶的开发利用提供研究基础。
1 仪器与材料。
1.1 仪器N1001 EYELA旋转蒸发仪 (上海爱朗仪器有限公司) ，大容量离心机 (北京医用离心机厂)，S3100 紫外分光光度计（韩国Scinco 公司），BP211D型十万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。
1.2 材料与试剂苎麻叶，采自湖北省咸宁地区，晒干，粉碎至5 mm以下的碎片，置50℃干燥箱中干燥12 h，密封，备用。没食子酸对照品：基准纯，购于上海分析试剂厂，置50℃真空干燥箱真空中干燥4 h。乙醇为工业级，其他试剂均为分析纯。
2 方法。
2.1 Folin—Ciocalteu 比色法测定总酚酸含量。
2.1.1 Folin—Ciocalteu试剂配制称取8 g钨酸钠和2 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用56 ml蒸馏水溶解，加入4 ml 85%的磷酸溶液和8 ml浓盐酸，文火回流10 h，然后加入1.2 g硫酸锂及6 ml双氧水，加热沸腾15 min 至亮黄色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入100 ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。
2.1.2 对照品溶液制备准确称取10.00 mg干燥的没食子酸，加蒸馏水适量，超声溶解，放冷，以蒸馏水定容至100 ml，制成每毫升含0.1 mg没食子酸的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 待测溶液制备。
提取工艺Ⅰ待测溶液制备: 将全部总酚酸浸膏用70%的乙醇溶解，定容至100 ml，低温避光保存，测定时再稀释至适宜浓度。
提取工艺Ⅱ待测溶液制备：精密称取一定量总酚酸干浸膏（约20 mg），用70%浓度乙醇溶解，定容至10 ml，低温避光保存，测定时再稀释至适宜浓度。
2.1.4 总酚酸含量测定准确量取0.5 ml待测溶液置10 ml干燥具塞比色管中，加6 ml水，0.5 ml福林试剂，充分摇匀，加入0.75 ml 20%碳酸钠溶液，混匀，以蒸馏水稀释至刻度。40 ℃水浴40 min。同时制作空白管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制作不加显色剂的对照管。于755 nm波长处测定吸光度值。
2.1.5 工作曲线绘制准确量取对照品溶液0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80 ml于10 ml干燥具塞比色管中，照总酚酸含量测定项下操作，于755 nm波长处测定各吸光度值。以吸光度值 Y 对对照品质量 X（mg） 作图，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程为 Y= 17.206 8 X + 0.032 3，r= 0.999 9。该方法的平均加标回收率为102.87%，方法的变异系数为3.60%。
多酚含量（mg/100g）=X(mg)×稀释倍数0.5×总酚酸称样量（mg）×100。
多酚含量（mg/100g）=X(mg)×稀释倍数0.5×总酚酸称样量(mg)×总酚酸干浸膏量（mg）原料量（g）×100。