马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究
作者：刘建国，喻国华，廖燕，曾怡春。
【摘要】 目的观察马齿苋合剂水提液对单纯疱疹病毒2型(HSV—2)的抑制作用。方法马齿苋水提液作用于Hep—2、Vero细胞和原代兔肾(PRK)3种细胞上研究其抗病毒作用。结果马齿苋合剂水提液在Hep—2、Vero细胞和PRK细胞上均有明显的抗HSV—2作用，对HSV—2的最小有效浓度(MTC)为0.5 mg／ml，而且毒性低，最大无毒浓度(TDO)为12mg／ml，治疗指数(TI)为30.0，并有直接杀灭HSV—2的作用。结论马齿苋合剂水提液具有抗HSV—2作用。
Abstract：ObjectiveTo study the inhibitive effect of Purslane misture water extract on HSV—2．MethodsThe anti—virus effect was observed on Hep—2，Vero and PRK cells after treated with Purslane misture water extract.ResultsThe water extract from Purslane misture possessed distinct anti—HSV—2 effect．The MTC was 0.5 mg／ml，TDO was 12 mg／ml，and TI was 30.0．It possessed low toxicity and direct killing—virus effect on HSV—2．ConclusionPurslane misture water extract possesses anti—HSV—2 effect．。
Key words：Purslane misture water extract； Herpes simplex virus2(HSV—2); Experimental study HSV—2是一种常见的传染性病原体，可引起生殖道疱疹、病毒性脑炎等多种疾病，而且是宫颈癌的协同诱因。马齿苋Portulaca‘oleracea L．又名马齿草(《雷公炮炙论》)，马苋(《本草经集注》)，长命菜(《中国药用植物图鉴》),为马齿苋科植物马齿苋的全草，生于田野路边及庭院废墟等向阳处，分布于全国大部分地区。国内对马齿苋的研究［1］多集中于马齿苋的化学成分和抗菌作用的研究,但有关马齿苋合剂水提液的抗病毒实验研究很少。本文对马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的药效进行了实验研究。现报道如下。
1 材料。
1.1 细胞 Hep—2、非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）和原代兔肾细胞（PRK）3种细胞引自江西省卫生防疫站，均用Eagle培养基传代培养。PRK取自10 d内的乳兔，常规方法制备细胞，用5％乳蛋白水解物培养。
1.2 病毒。
HSV—2 333株由南昌大学医学院病毒研究所提供，Vero细胞于RPMI—1640基础培养液中加入10％的新生牛血清，100 U／ml青霉素，100 μg／ml链霉素，置5％CO2孵箱中37℃ 培养，3d传代1次。滴度为TCID50=105，实验用103 TCID50／ml。
1.3 药物。
马齿苋(购于江西中医药高等专科学院附属医院中药房)40 g，配合黄芪60 g，放入500 ml三角烧瓶，加入双蒸水200 ml浸泡过液，经水连续提取3次，合并3次提取液共400 ml，56℃水浴浓缩至100 ml，抽滤除菌，分装小瓶放—20℃ 冰箱保存备用。无环鸟苷滴眼液(ACV) (湖北潜江制药股份有限公司生产，批号H19993456)，用Hank‘s稀释成不同浓度，放置冰箱保存备用。
2 方法。
2.1 细胞毒性实验。
将已长满单层的Hep—2细胞、Vero细胞和PRK去生长液，换成含2％小牛血清的MEM维持液，每瓶细胞分别加入不同浓度的马齿苋合剂水提液(0.5～12 mg／m1)0.1 ml，每一浓度的药物均重复4瓶，并设未加药物的细胞做正常对照。置37℃培养箱中培养l44 h，每天观察细胞的变化情况，并记录结果。
2.2 病毒感染性滴度的测定。
将不同稀释度的HSV—2接种细胞，每管0.1 ml，每个稀释度4瓶，37℃吸附1 h，弃上清液，加2％小牛血清的MEM培养液1 ml，置37℃培养，每日检查病毒生长情况，观察特征性细胞病毒(CPE)，7 d后记录结果。CPE记录方法：“—”为无CPE；“±”为可疑；“+”为25％的细胞出现CPE；“++”为50％的细胞出现CPE；“+++”为75％的细胞出现CPE；“++++”为100％的细胞出现CPE。
将病毒接种于已长满单层的细胞瓶上，每瓶接种103TCID50／ml HSV—2病毒液0.1 ml，37℃ 吸附1 h，弃上清液后，Hank‘s液洗3次，每一瓶加入含不同浓度的药物0.1 ml，加维持液0.9 ml，每个浓度药物均重复4瓶，并设置未加药物的病毒对照和细胞对照。然后置37℃培养箱中培养。每日观察CPE，当病毒对照达到“++++”时，判定结果，使病变减少两个“+”为有效。