Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响
【摘要】 探讨GenistEin对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的 影响 。 方法 采用MTT法检测GenistEIn单用及合用顺铂对细胞增殖的影响，流式细胞仪 分析 Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果 Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用，并显著提高了其对顺铂的敏感性（P0.05）；0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/ml Genistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/ml Genistein均可将细胞阻滞于G2/M期并诱导一定程度的凋亡，10μg/ml Genistein还可进一步的干扰S期进程；当顺铂与Genistein合用时，两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论 Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖，并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。 代写论文。
0 引言 肿瘤耐药是卵巢癌患者生存率低的重要原因，因此迫切需要新型有效的化疗方案。Genistein（又称染料木黄酮）是一种有潜力的化疗增敏剂，广泛存在于大豆和多种中草药中，具有预防肿瘤的作用。近来 研究 表明Genistein还可以增强多种耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[1,2]，但Genistein是否可以增强耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性尚未见报道。本文从增殖、凋亡和顺铂敏感性方面分析了Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3的影响。
1 材料与方法。
1.1 材料 人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3，由本科实验室保存，该细胞系对顺铂等多种药物耐药[3]。Genistein、二甲基亚砜（DMSO）购自Sigma，Genistein用DMSO配成储备液（10mg/ ml），20℃保存；顺铂（齐鲁制药厂）；噻唑蓝(MTT)购自Amresco。细胞周期试剂盒为DNAPrep Stain kit(BECKMANCOULTER)；Annexin VFITC/PI凋亡试剂盒为Apoptosis Detection Kit(Biovision)。全自动酶标仪为Wellscan MK3型(Labsystems Dragon)；流式细胞仪为ELITE ESP型（BECKMANCOULTER）。 代写论文。
1.2 方法 毕业论文。
1.2.1 顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响 收集对数生长期细胞，8×103个/孔接种于96孔培养板，37℃、50ml/L CO2孵箱培养12h，细胞贴壁后弃去培养液，加入含不同浓度药物的培养基200μl，顺铂组浓度为0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml，Genistein组浓度为2.5、5、10、20、40、80μg/ml， 为评估DMSO对实验的影响，设6个DMSO组（浓度与Genistein各组DMSO含量一致），同时设对照组，每组设6个复孔。继续培养72h，每孔加入MTT(5mg/ml，20μl),继续孵育4h后弃培养液，每孔加入DMSO150μl，振荡10min，酶标仪测吸光度(A490)，按以下公式 计算 ：细胞增殖抑制率=（对照组A490值实验组A490值）/对照组A490值× 100%，取6孔均值绘制浓度效应曲线。
1.2.2 顺铂联合Genistein对SKOV3细胞增殖的影响 方法基本同前。顺铂选0.625、1.25、2.5、5μg/ml 4个浓度; Genistein选2.5、5、10、20、40μg/ml 5个浓度，设对照、单药、联合共30种组合。用以下公式计算两药的相互作用: q=E(AB)/[EA+EBEA×EB]。其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用的抑制率，q1.15为协同作用，0.85。
1.2.3 顺铂、Genistein单药及联合对周期和凋亡的影响 根据MTT结果，顺铂浓度选2.5μg/ml, Genistein选5.0、10.0μg/ml，设对照、单药和联合共6组。加药48h后收集细胞，分别按DNAPrep Stain Kit试剂盒和Apoptosis Detection Kit试剂盒说明书进行细胞固定、染色，上流式细胞仪分析。 代写论文。
1.3 统计方法 采用SPSS10.0进行统计学处理。 论文网。
2 结果。
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2.1 顺铂、Genistein单药对SKOV3细胞增殖的影响 顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用随浓度的增加呈平缓的增强趋势，当浓度达10μg/ml以上时，顺铂对增殖的抑制率才急剧上升，并在20μg/ml时达到51.6%，见图1，与对照组相比差异显著(P0.05)。而顺铂在2.5μg/ml浓度以下时，对SKOV3细胞增殖的抑制作用与对照组无显著差异(P0.05)。 Genistein对SKOV3细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性，5μg/ml以上的各组与对照组差异显著(P0.01)，当Genistein浓度达40μg/ml后，抑制率急剧上升，80μg/ml Genistein的抑制率达到96.9%。而用于溶解Genistein的DMSO对SKOV3细胞增殖并无明显影响(P=0. 398)，见图2。
毕业论文。
图1 顺铂抑制耐药卵巢癌细胞系skov3增殖的浓度效应曲线（略）。
代写论文。