复方丹参方及其成分配伍的体外抗凝血作用
【摘要】 目的 系统考察复方丹参方及其成分配伍的体外抗凝血作用，发现复方丹参方活血作用的物质基础，为体内动物实验提供参考依据。方法 以凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶时间(TT)为检测指标，观察复方丹参方、丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1对这些指标的影响。结果 体外凝血研究的结果表明复方丹参方、丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1及其成分组合能延长凝血时间，且作用呈剂量依赖性。丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1起主要作用，丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1的成分配伍与复方丹参方的抗凝血作用没有明显差别。结论 丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1是复方丹参方活血作用的物质基础，两者配伍可以代替复方丹参方的抗凝血作用。
[Abstract]Objective To observe the blood anticoagulation effects of Fufangdanshenfang and understand the contributions of different constituents to activities of Fufangdanshenfang.Methods The action of Fufangdanshenfang and its constituents on prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), thrombin time (TT) were determined.Results PT，APTT and TT were obviously prolonged in Fufangdanshenfang, TanshinoneⅡA, Ginsenoside Rg1 group, and these changes also observed in group of combined of TanshinoneⅡA and Ginsenoside Rg1.Conclusion TanshinoneⅡA and Ginsenoside Rg1 are active constituents of Fufangdanshenfang in the effect of anticoagulation.
[Key words] Fufangdanshenfang; tanshinoneⅡA; ginsenoside Rg1; anticoagulation。
复方丹参方是临床最常用的治疗血瘀性冠心病的中药方，该方由丹参、三七和冰片三味中药组成，活血化瘀有效成分主要包括：丹参素、丹参酮ⅡA、人参皂甙Rg1等[1～3]。大量的药理学研究表明，复方丹参方具有抗心肌缺血、舒张血管、保护内皮损伤、缩小心肌梗死面积、抗自由基、减少缺血再灌注心肌损伤、保护心肌高能磷酸化合物及线粒体膜等广泛的心血管活性[4～10]。已有的研究基本明确了复方丹参的有效成分、药理作用、代谢产物及临床疗效。但是对于复方丹参方有效成分为基础最佳分子组合研究尚未系统开展。本文系统考察了复方丹参方及其成分配伍的体外抗凝血作用，发现了复方丹参方活血作用的物质基础，为体内动物实验提供参考依据。
1 材料与方法。
1.1 实验动物 Wistar大鼠，年龄6周，体重180～220g。
1.2 实验试剂及仪器 丹参酮ⅡA、人参皂苷Rg1购自中国生物制品研究所，凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶时间(TT)检测试剂盒购自上海中生生物试剂公司。PABER—1型血小板聚集凝血因子分析仪，北京中勤世帝科学仪器有限公司。
1.3 实验方法。
1.3.1 复方丹参方的配置 称量丹参 450g、三七 141g、冰片 8g，先提取丹参，第一次加入乙醇回流1.5h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.30 (55℃～60℃);第二次加入50%乙醇回流1.5h，滤过;第三次将三七细粉、冰片加入到丹参滤渣中，加5倍体积水回流2h， 滤过，合并第二、三次滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.40(55℃～60℃)。将制备的复方丹参方离心(12000g, 15min)，将上清用双蒸水调整浓度(相当原料药的浓度)为1kg/L，用0.22μm 的滤膜过滤除菌。放置在4℃冰箱储存。
1.3.2 富血小板血浆和贫血小板血浆样品的制备 用3%的戊巴比妥麻醉Wistar大鼠，在下腔静脉采血5ml(抽血前针管内混以3.8%枸橼酸钠0.5ml，取血时要注意防止气泡形成，以免影响血小板功能的测定)，然后离心(800rpm，10min)，得富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP),将下层再离心(3000rpm，15min)，得贫血小板血浆(platelet poor plasma，PPP),用PPP测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶时间(TT)。
1.3.3 PT的测定 取PT凝血活酶冻干品一只，加2.2ml蒸馏水，轻摇溶解;取贫血小板血浆0.1ml，药物1、2、4μl,37℃孵育2min后，加入37℃预温的凝血活酶0.1ml，混匀，记录凝固时间，即为凝血酶原时间(PT)。
1.3.4 KPTT的测定 取KPPT凝血活酶冻干品一只，加1.5ml蒸馏水，轻摇溶解;取KPPT凝血活酶悬液0.1ml，贫血小板血浆0.1ml，药物1、2、4μl,37℃孵育5min后，加入0.1ml 0.025mol/l的CaCl2溶液，混匀，记录凝固时间，即为活化部分凝血活酶时间(KPTT)。
1.3.5 TT的测定 取凝血酶冻干品一只，加5.0ml蒸馏水，轻摇溶解;取贫血小板血浆0.2ml，药物1、2、4μl,加入37 ℃预温的凝血酶0.1ml，混匀，记录凝固时间，即为凝血酶时间(TT)。
1.4 统计学处理 各组实验数据以均值±标准差(x±s)表示。两组间的差异显著性分析用t检验。