黄芩素治疗子宫内膜异位症的作用研究

【摘要】 目的观察黄芩素对大鼠子宫内膜异位症防治作用及其机制。 方法 采用手术移植法制备大鼠子宫内膜异位症模型,大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和黄芩素高、低剂量组，测定大鼠的血清TNFα，IL6，IL8含量及脾脏NK细胞活性，采用免疫组织化学的方法检测异位内膜标本中Bcl2，ICAM1的表达。结果黄芩素 治疗 组与模型组相比血清TNFα，IL6，IL8活性明显降低，脾脏NK细胞活性显著增高，异位内膜标本中ICAM1， Bcl2表达明显下降。结论 黄芩素对子宫内膜异位症大鼠具有治疗作用，其作用机制可能与其抑制TNFα，IL6，IL8产生，抑制ICAM1 ，BcI2的表达以及增强脾脏NK细胞活性有关。

【关键词】 黄芩素；子宫内膜异位症； 自然 杀伤细胞；细胞间黏附分子1 论文网。

The Therapeutic Effects of Scutellarin on Endometriosis in Rats。

代写论文。

Abstract：ObjectiveTo investigate the therapeutic effects and mechanism of scutellarin on endometriosis in rats.MethodsThe endometriosis model of rats was created by surgical implantation and rats were randomly divided into four groups. At the end of the experiment,the activities of serum TNFα，IL6，IL8 were observed, the expression of Bcl2 and ICAM—1 were also observed by immunohistochemistry and the activity of nature kill cell in spleen was measured. ResultsThe activities of serum TNFα，IL6，IL8 in scutellarin groups were lower than those in the model control group , the expressions of Bcl2，ICAM1 in scutellarin groups were lower than those in the model control group ,the activity of nature kill cell in spleen of scutellarin groups rose more significantly than that of the model control group .ConclusionScutellarin may have the therapeutic effect on the endometriosis of rats by inhibiting the producing of serum TNFα，IL6，IL8 , decreasing the expressions of Bcl2，ICAM—1 and enhancing the activity of nature kill cell in spleen. 代写论文。

Key words：Scutellarin; Endometriosis; NK cell; ICAM1 毕业论文。

子宫内膜异位症(endometriosis EM) 是一种常见的妇科疾病，主要指子宫内膜在子宫腔被覆面以外的地方种植生长，是一种具有侵袭性的良性病变。该病的临床表现主要为顽固性的痛经，腹痛及不孕等，成为危害当今育龄妇女健康及生活质量的一种很重要的疾病。EM在育龄妇女中发病率约15%左右，在不孕妇女中高达50%，其发生机制可能与体腔上皮化生学、激素、免疫、环境、遗传学说等因素相关［1，2］。黄酮类化合物是一类低分子的广泛分布于植物界的天然植物成分,具有多方面的生物活性,如:抗炎、抗病毒、抗氧化、抗衰老、免疫调节以及抗肿瘤作用等。黄芩素（scutellarin）是从黄芩中提取的一种黄酮类单体化合物［3］。本实验通过建立大鼠子宫内膜异位症模型后给予黄芩素进行治疗，观察黄芩素对子宫内膜异位症大鼠细胞因子，ICAM1及凋亡相关因素的 影响 ，为探讨子宫内膜异位症的治疗提供 理论 和实验依据。 代写论文。

1 材料与方法 论文代写。

1.1 材料。

雌性Wistar大鼠，体重为（220±20） g，鼠龄8～12周，由华中 科技 大学同济医学院实验动物中心提供。黄芩素：sigma公司；大鼠IL6， TNFa检测试剂盒、大鼠IL8 ELISA检测试剂盒：北京中杉金桥生物技术有限公司；Bcl2检测试剂盒、大鼠ICAM1检测试剂盒：武汉博士德生物技术有限公司；其余为国产 分析 醇。I125一放免测定仪及FJ2107液体闪烁计数器：西安262厂；ELISA酶标仪：美国BioRed公司2550型。 毕业论文。

1.2 动物模型及分组造模方法［4］：雌性未孕Wistar大鼠，体重（220±20）g。皮下注射乙烯雌酚0.2 mg/只促情，以20%乌拉坦1.5 g/kg ip麻醉，待麻醉生效后，将大鼠固定操作台上，腹部剪毛，碘伏消毒，在无菌条件下开腹，约1.5 cm长，右侧离卵巢0.5 cm处分离子宫，结扎后在中间剪取约2 cm一段子宫，剖开子宫剥离子宫内膜，将内膜剪成3块，分别缝于子宫分叉处、左侧卵巢附近、左侧腹膜壁层，关腹缝合。每鼠ip庆大霉素0.1 ml × 3 d，正常清洁饲养。 　　正常饲养1个月后再次开腹，大鼠异位组织生长好，肉眼观察见移植物体积增大，呈结节状、囊状，内有液体积聚，有的为内含血性液的囊性小泡，周围被结缔组织覆盖，并有血管生成，表明模型成功。实验分4组:正常对照组、模型对照组、黄芩素高剂量组（4 mg/kg），黄芩素低剂量组（2 mg/kg），于造模1个月后腹腔给药，连续4周，4周后无菌摘取大鼠眼球取血，然后断头处死，剖取大鼠在位及异位子宫内膜组织及脾组织。 论文代写。

1.3 检测指标 论文网。

1.3.1 病理组织HE染色取部分大鼠在位及异位子宫内膜组织立即固定于10%中性福尔马林中，然后酒精梯度脱水，二甲苯透明浸蜡，石蜡包埋后常规切片, HE染色，光学显微镜检查。 论文代写。

1.3.2 血浆PGF2a，PGE2检测采用放免法检测。 代写论文。

1.3.3 细胞因子检测血清TNF α，IL6活性测定采用RIA法；血清IL8检测采用ELISA双抗体夹心法，按试剂盒说明书操作。

1.3.4 BCL2检测组织石蜡切片后按免疫组化试剂盒操作说明进行。

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1.3.5 ICAM1检测取出的异位内膜新鲜组织，迅速放入液氮低温冷冻固定后，进行连续冰冻切片；室温放置30 min后，入4℃丙酮固定10 min，PBS洗，5 min 3次；3%过氧化氢孵育5～10 min，清除内源性过氧化物酶的活性；PBS洗，5 min× 2次；下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。 论文代写。

1.3.6 NK细胞活性检测各组大鼠处死后酒精浴，超净台中分别取脾，研磨、分离成单细胞悬液，用完全培养基调整细胞数为5×l06/ml，培养Yac1细胞，于生长旺盛期将细胞离心，调整Yac—1细胞浓度与脾细胞浓度为1∶50，加入到96孔板中，同时分别设脾细胞和Yac1细胞对照孔，5%CO2，37℃ 培养4 h，离心弃上清，每孔加入MTT 0.5 mg/ml，继续培养4 h，1 500 r/min离心弃上清，每孔加入盐酸异丙醇，充分溶解结晶颗粒，于570 nm测定光密度OD值，并 计算 其杀伤率。计算公式：NK细胞杀伤活性(%)=［1－(实验孔OD一脾细胞对照孔OD)/Yac—1对照孔OD］×100%。 毕业论文。

1.4 统计学方法所有数据用±s表示，组间比较采用t检验处理。

2 结果。

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2.1 病理组织HE染色模型组：异位内膜呈子宫腔状或环形锯齿状封闭式结构，有囊肿形成，囊壁厚。腺体数目多，腺体上皮呈柱状，腺腔大，增生现象明显，向间质生长，呈假腺体改变。间质中有大量炎细胞浸润，血管较多。治疗组：异位内膜呈缝隙状，个别呈环状封闭式结构，多无囊肿形成。异位内膜极薄，呈萎缩性改变，腺体数目少，腺腔小，腺上皮呈扁平或矮立方形，未见假腺体改变，间质细胞小而稀疏，并有纤维化倾向,有少量白细胞浸润，血管较模型组少。 论文网。