自制棉酚饵料对小白鼠的抗生育作用
摘要：为了探讨棉酚对小白鼠生殖功能的影响，本试验将30只健康小白鼠（雌、雄各半），随机分为3组，每组10只（雌雄各半），对照组饲喂基础饵料，试验1组饲喂添加1.0%的棉酚的基础饵料，试验2组饲喂添加0.5%溴敌隆的基础饵料，试验结束后计算适口性，睾丸、卵巢脏器系数，制作睾丸、卵巢组织学切片，统计合笼后的产仔情况。
结果表明，在适口性方面，添加1.0%棉酚的混合饵料比添加0.5%溴敌隆的混合饵料要好；试验1组，小鼠的生精小管的管壁厚度比对照组薄（P0.01），管腔直径大。
试验2组小鼠的生精小管管壁管，管腔直径与对照组相比显著变小（P0.05）。
结果表明，棉酚对小鼠精巢有影响，影响生精小管管壁直径，精子数量，并且降低了雌鼠所怀幼仔个数。
关键词：棉酚；适口性；脏器系数；精巢 中图分类号：TQ645.9+7 文献标识码：A 文章编号ki.issn0439—8114.2016.13.034 植物不育剂是由具有抗生育作用的天然植物中的提取物配制而成，用不育剂配制的混合饵料，对雌雄鼠生殖机能均有一定的破坏性，起到了阻断生殖的作用，又不污染环境和破坏生态平衡。
所以近年来选用植物不育剂制作环保型鼠药越来越受到人们的重视。
棉酚是棉子、棉壳、棉子饼及棉粕中含有的一种有毒物质，它是萘的衍生物。
在动物的饵料中加入少量的棉酚，并不会引发中毒，但加入大量棉酚，在猪、牛和羊中有中毒的记载[1]。
游离棉酚的中毒量与饵料中蛋白质水平、亚铁离子水平及钙离子水平有关[1]。
棉酚对雄性大鼠有抗生育作用，但对大鼠的交配行为及副性腺的功能均无明显的影响，亦不改变大鼠及猴血浆中睾酮的含量[2]。
但影响抗生育的机理有待于研究。
本试验以小白鼠作为试验动物，并且喂以配有棉酚的自制饵料饲喂小白鼠，记录摄食量，体重，计算适口性，脏器系数，用组织学方法研究精巢和卵巢组织结构的变化，观察小鼠怀幼崽个数。
试验目的是通过棉酚研究出植物源的无公害的灭鼠饵料，达到对田间、林地害鼠种群的调控。
1 材料与方法 1.1 试验动物 30只昆明小白鼠源于西安医学院动物实验中心，体重为14～20 g。
随机分为3组，每组10只，雌、雄各半，分开放置于小鼠鼠笼。
1.2 配制混合饵料 基础饵料的配制：玉米35%；麸皮22%；豆渣24%；盐1%；骨粉1%；面粉17%。
试验1组在基饵中添加1.0%的棉酚（购自西安慈缘生化科技有限公司）；试验2组在基饵中添加0.5%溴敌隆（购自陕西先农生物科技有限公司）。
各组饵料固定为饼状烘干待用。
1.3 试验方法 1.3.1 加药饲养 每天每只饲喂基饵或混合饵料10 g，自由饮水。
一周换一次垫料，换垫料时称量所剩饵料的重量，试验期共30 d，计算不同饵料对小白鼠日摄食量的影响，日摄食量（g）=（1030—剩余饵料）30。
1.3.2 第一部分 1.3.2.1 脏器系数 30 d后，从3组中每组雌雄各选2只，共12只，称重，20%乌来糖腹腔麻醉，经左心室输入0.1 mol/L生理盐水磷酸缓冲液100～150 mL（pH 7.4），剪破右心房以使血液流出，再输入4%多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸缓冲液300 mL（pH 7.4），立即取双侧睾丸和卵巢，测脏器系数。
1.3.2.2 组织学切片 另一侧睾丸和卵巢置于Bouins液中固定，做冰冻切片。
切片厚度8 m，H.E染色，在显微镜下观察并测量雄性各组同一横截面生精小管管径、生殖上皮厚度。
观察并测量卵巢中黄体的面积。
1.3.3 第二部分 30 d后，将剩余的小鼠合笼并重新分为3组（每组雌、雄鼠各3只），对照组：饲喂基饵；试验1组：饲喂1.0%棉酚混合饵料；试验2组：饲喂0.5%的溴敌隆。
合笼后均以正常饵料喂养，观察雌性个体的产仔潜伏期和产仔数量。
1.4 统计分析 用SPSS10.0软件系统对日进食量、脏器系数、生精小管管径、生殖上皮厚度、黄体的大小、产仔潜伏期和产仔数量进行统计分析，数据以平均值标准误（xsd）来表示，根据Non—parametric test，产仔潜伏期和产仔数量为非正态分布，因而用Mann—Whitney U test，其他为正态分布，用Independent—Samples T test，P0.05时表示两组数据具有统计学意义。
2 结果与分析 2.1 适口性分析 由表1可知，与对照组相比，试验1组雌、雄小白鼠日摄食量差异不显著（P0.05），而试验2组的日摄食量均极显著小于对照组（P0.01）。
在一定程度上摄食量与适口性是呈正相关的，所以可得知添加1.0%棉酚的混合饵料的适口性比添加0.5%溴敌隆的混合饵料要好。
2.2 小鼠脏器指数 由表2可知，试验1组的睾丸脏器系数与对照组之间差异不显著（P0.05）。
由表3可知，雌性试验1组卵巢脏器系数与对照组之间差异不显著（P0.05）。
2.3 混合饵料对睾丸、卵巢结构的影响 由图1可知，光镜下观察到对照组生精小管管壁完整，管壁较厚。
间质中可见单个或成群地间质细胞。
试验1组和试验2组生殖上皮厚度较薄，睾丸间质增大，间质细胞较为少见。
试验1组和试验2组小鼠的生精小管管腔直径比对照组极显著性增大。
试验1组和试验2组小鼠的管壁厚度与对照组相比极显著或显著变薄。
对照组雌性小鼠和试验组卵巢中发育成熟的卵泡均较多，但试验2组黄体萎缩，结构模糊。
试验1组雌性小鼠和对照组无显著性差异，试验2组雌性小鼠黄体最大横截面积极显著低于对照组。
2.4 产仔情况 由表4可知，试验1组的产仔数明显比对照组少（P=0.01）。
试验2组配对后死亡，所以无产仔数。
3 讨论 用含棉酚的混合饵料饲养的小鼠日摄食量与对照组之间没有明显差异，表明混合饵料并不影响到小鼠的进食量，有较好的适口性。
而食用溴敌隆混合饵料的小鼠日进食量比对照组明显减小，表明溴敌隆混合饵料适口性差。
食用混合饵料的雄性睾丸脏器系数和雌性卵巢脏器系数明显比对照组小，说明棉酚作用在动物体上一段时间后睾丸和卵巢的相对质量减小了，但质量的减少不仅与药物有关，可能与适口性也有关。
有研究认为棉酚对睾丸曲细精管生精上皮的损伤，以晚期精子细胞和初级精母细胞最为明显。
如精母细胞核固缩，精子细胞核空泡化，形成多核巨细胞，胞浆呈嗜酸性。
然而，即使在曲精细管生精上皮受到严重损伤，只剩下1～2层细胞的情况下，仍能见到精原细胞和支持细胞，由此可见，晚期精子细胞和初级精母细胞对棉酚较为敏感，而精原细胞和支持细胞对棉酚则表现一定的耐受性。
本试验通过制作小鼠精巢组织学切片，观察到棉酚试验组管壁厚度均变薄，管腔直径变大，合笼后产仔量减少，可能长期服用棉酚减少精子数量，从而降低生育能力。
本试验还观察到棉酚试验组雌性卵巢的组织学切片发现试验组雌性个体卵巢内黄体面积与对照组相似，未出现萎缩，而食用溴敌隆组雌性黄体极度萎缩，还未合笼就已死亡，说明毒性极大。
有研究认为黄体能够分泌雌激素和孕激素，这两种激素对于子宫内膜的周期性变化及受精卵着床、胎儿发育极为重要[3]。
可见，棉酚可能只是影响雄性精巢的发育，而对雌性影响不大，这与其他学者研究结果一致[4]。
参考文献： [1] 王 刚，唐克伟.含棉酚饲料的科学应用[J].中国养殖学，2009， 36（1）：44—46. [2] 张寅恭.棉酚抗生育作用的研究II.雄性大鼠的抗生育作用[J].上海中医学，1980（6）：43. [3] 何凤琴.雷公藤和莪术混合饵料对棕色田鼠生殖作用的影响[J].中国媒介生物学及控制杂志，2013，24（1）：34—38. [4] 雷海鹏.醋酸棉酚对雄性大鼠的抗生育作用[J].中华医学杂志， 1979，59（7）：402.出处：湖北农业科学作者：何凤琴 李宁宁。