地黄梓醇降糖作用的实验研究
作者：赵素容 卢兖伟 陈金龙 段海峰 吴祖泽。
【摘要】 目的研究地黄梓醇对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响。方法雄性KM小鼠尾静脉注射四氧嘧啶60 mg/kg建立糖尿病动物模型。梓醇以200，100，50 mg/kg剂量灌胃给药2周，观察其对糖尿病小鼠血糖、血脂和糖耐量的影响。结果梓醇能明显降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖水平、改善糖耐量和血脂水平，并且呈剂量依赖关系。结论地黄梓醇对四氧嘧啶致糖尿病小鼠有显著的降血糖作用。
Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of catalpol from Rehmannia glutinosa Libosch. on blood glucose of alloxan—induced diabetic mice. MethodsCatalpol was ig administered for 2 weeks at the dose of 200, 100, 50 mg/kg to observe its effects on blood glucose, blood lipid and glucose tolerance in alloxan—induced diabetic mice. ResultsCatalpol significantly decreased the blood glucose, improved the oral glucose tolerance and blood lipid level in alloxan—induced diabetic mice in a dose—dependent manner. Conclusion Catalpol has obvious hypoglycemic activity in alloxan—induced diabetic mice.
Key words： Catalpol; Hypoglycemic activity; Diabetes mellitus 中药地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根，具有滋阴清热、补血止血等功效，临床应用极为广泛。地黄的主要化学成分为苷类，其中以环烯醚萜苷类为主，梓醇（化学结构式如图1）是其主要活性成分之一，具有利尿、缓和泻下、降血糖、神经保护等生物活性［1～4］。但由于天然产物成分复杂多样，地黄中梓醇等环烯醚萜类化合物结构近似，极性较大，而且化学稳定性较差，增大了梓醇分离纯化的难度。因样品来源困难，限制了对梓醇生物活性的研究。本实验在解决了梓醇分离纯化工艺的基础上，首次在实验性糖尿病动物模型上观察了其降糖作用。
图1 梓醇的化学结构式（略）。
1 材料与方法。
1.1 样品 梓醇样品由本实验室制备，其结构经ESI—MS，1H—NMR，13C—NMR鉴定，HPLC法测得样品的梓醇含量为96%。
1.2 动物 KM小鼠，♂，(20±2) g，清洁级，由军事医学科学院实验动物中心提供。合格证号：SCXK—(军)2002—001。
1.3 试剂 盐酸二甲双胍购自天津中新药业股份有限公司新新制药厂；四氧嘧啶，Sigma产品；胆固醇试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒，南京建成生物工程研究所。
1.4 仪器 GLUCOCARD II血糖仪，附加血糖试纸（ARKRAY，日本）；SABS—18型自动生化分析仪（意大利）。
1.5 方法。
1.5.1 四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的制备 取70只健康KM小鼠，随机分出8只为正常组动物。其余小鼠在禁食16 h后（不禁水），尾静脉快速注射新鲜配制的2%四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60 mg/kg。正常对照组小鼠在禁食16 h后于尾静脉注射相应体积的生理盐水。上述小鼠经过72 h的自由饮食后，于尾静脉取血用血糖仪测定血糖值，挑选血糖值大于16.7 mmol/L的小鼠作为糖尿病小鼠。
1.5.2 动物分组与给药 取40只造模成功的糖尿病小鼠按血糖值分层随机分为5组，每组8只：模型组，阳性药对照组（盐酸二甲双胍500 mg/kg），梓醇高、中、低3个剂量组（200，100，50 mg/kg）。从造模第4天开始给药，治疗组小鼠分别灌胃给予梓醇及盐酸二甲双胍，正常组和模型组小鼠灌胃给予相应体积的蒸馏水，1次/d，连续2周。
1.5.3 实验观测指标 分别于给药前（0 d）、给药第7天、给药第14天于尾静脉取血用血糖仪测小鼠的血糖值。末次给药后小鼠禁食12 h，口服葡萄糖2.5 g/kg，尾静脉取血分别测定口服前（0 h）、口服后0.5，1，2 h的血糖值，并用梯形面积法计算糖耐量曲线下面积（AUC）。口服葡萄糖耐量实验后小鼠摘眼球取血，离心分离血清。用自动生化分析仪测定血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）的含量。
1.6 统计学处理定量指标以±s的形式表示，对两组定量资料的结果分析，采用Student‘s t检验进行两组间均数的差异显著性检验。对单因素k（k＞2）水平设计实验结果，采用SPSS10.0统计软件对数据进行单因素方差分析，如果各组均数之间的差别有统计学意义，则用双侧Dunnett t检验将各处理组均数与对照组均数进行多重比较。当P＜0.05时，差异有统计学意义。