香附总黄酮的超声波提取工艺研究
作者：黄锁义 罗建华 张丽丹 蒙春越 刘娇 冯玲 张炜志。
【摘要】 目的探讨香附总黄酮的提取及鉴别方法，以充分利用香附植物资源，避免资源的浪费。方法采用超声波乙醇浸提法从香附中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.186 4 mg/ml，回收率为102.7%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取香附黄酮类物质的有效途径。
Abstract：ObjectiveTo establish the methods of extraction and identification for total flavonoids from Crperus rotundus.MethodsThe flavonoids were extracted with ethanol as the solvent from Cyperus rotundus by ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Cyperus rotundus .ResultBy this method the content of the total flavanone of Cyperus rotundus was C=0.186 4 mg/ml and the rate of recovery was 102.7%. This text provides the extraction and purification methods for the total flavanoids and the purity is high .ConclusionThis method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Cyperus rotundus.
Key words：Ultrasonic wave treatment; Cyperus rotundus; Total flavanone; Identification 香附，异名雀头香、莎草根等，为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L．的干燥根茎。秋季采挖，去毛须。归肝、脾、三焦经，有行气解郁、调经止痛之功效。用于肝郁气滞，月经不调［1］。香附目前尚无家种，商品全系野生，资源分布全国除黑龙江、内蒙古、宁夏、新疆及西藏等省、自治区外的各地区，各地田野及阴湿地均常见生长，尤其以海南货量大且质优，产量约占全国总产量的2/3［2］。香附用途十分广泛，妇科称其为“圣药”。李时珍《本草纲目》指出：“诸书皆云益气,而俗有耗气之说,宜于女人,不宜于男子者,非矣!”赞扬其为“气病之总司,女科之主帅”。书中该条之下列主治症38则，附方48首；其中妇科8则，内科杂病14则，血证5则，五官头面9则，外科2则，可谓详尽其用［3］。有文献报道香附的主要成分含挥发油、三萜类、黄酮类等［4］。 目前国内外对香附黄酮类的研究相当缺乏。黄酮类化合物在治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并因此开发出许多种药品和保健食品［5］。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［7］。但超声技术应用于提取香附中黄酮类物质的研究尚未见报道，本研究用超声波提取香附总黄酮及鉴别。现报道如下。
1 仪器与试剂。
1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率 40 kHz,江苏省昆山市超声仪器有限公司）；UV—755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF—I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB—III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
1.2 试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜香附（采于广西百色市）。
2 方法与结果。
2.1 总黄酮成分提取 取新鲜香附，烘干，粉碎。称取香附粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定香附中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3.1 波长的选择 取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测吸光度。结果见表1。
表1 分光光度法测定芦丁对照液吸光度结果（略）。
根据上表得回归方程：A=—0.031 1+13.518 4C，r=0.999 9。
2.3.3 提取物含量的测定 精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.094 9，根据回归方程：A=—0.0311+13.5184C，计算样品中总黄酮的含量C=0.186 4 mg/ml。