5氟尿嘧啶对人胃癌细胞超微结构和GSTπ表达的影响

作者：张江兰 薄爱华 吴靖芳 任君旭。

【摘要】 目的：探讨5氟尿嘧啶对人胃癌细胞的结构和GSTπ表达的影响。方法：在人胃癌BGC823细胞株培养液中加入5氟尿嘧啶，继续培养5h或10h，然后用HE、免疫组化染色和铀铅染色。光镜、电镜下观察。结果：10h组胃癌细胞外型畸变、细胞器破坏严重；GSTπ灰度发生变化。结论：5氟尿嘧啶作用10h对人胃癌细胞超微结构及GSTπ基因表达有明显影响。

【关键词】 胃肿瘤;免疫组织化学;5氟尿嘧啶。

【ABSTRACT】 Objective:To study the influence of 5Fliorouracil on structure of human gastric cancer cells and the expressions of GSTπ.Methods:5Fliorouracil was added to culture medium of BGC823 gastric cancer cells and continuously cultured for 5h or 10h,then the human gastric cancer cells were stained with haematoxylin Eosin(HE)、dyed with immunohistochemical method and acid Ulead citrate,which was observed under light and electiom microscope.Results:BGC823 cells,features developed by aberration and the oraganells were destructed severely in experimental group of 10 hours,and the ash of GSTπ was changed.Conclusion:The influence of 5Fliorouracil on ultrastructure and the expressions of GSTπ in 10 hours group was obvious.

【KEY WORDS】 Stomach Neoplasms,Immunohistochemistry,Research,5Fliorouracil。

5氟尿嘧啶(5FU)是一种嘧啶拮抗剂，它是临床上最常用的治疗实体瘤的化疗药物之一，特别是消化道癌和乳腺癌治疗效果好。对卵巢癌、宫颈癌、肺癌、绒毛膜上皮癌等也有效。我国是胃癌高发地区之一，5FU是治疗进展期胃癌的重要药物。目前虽然人们对5FU抗癌机制的认识已逐渐深入，但关于5FU对癌细胞超微结构及基因表达的影响报道极少。为了探讨5FU抗肿瘤的作用途径及对GSTπ表达的影响，我们利用细胞培养SP免疫组化染色技术，5FU作用5h和10h后，对人胃癌细胞超微结构GSTπ表达状况进行研究，为深入认识5FU的作用途径提供科学依据。

1 材料与方法。

1.1 一般资料 5氟尿嘧啶由深圳万乐药业有限公司生产。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组织化学试剂盒及兔抗人GSTπ抗血清和DAB显色剂由北京中山生物技术公司提供。

1.2 方法 将5×104/mL浓度的BCG823胃癌细胞置于无菌96孔板和6孔板中，置CO2培养箱中培养24h，在6孔板中加入消毒盖玻片，使细胞贴壁生长（爬片）。将6孔板中培养的癌细胞分对照组不加5FU培养，实验组加入5FU注射液15μL(含0.375mg)，然后继续37℃,培养5h或10h。取出贴壁癌细胞。4%多聚甲醛固定30min,常规SP法染色。阴性对照用PBS代替Ⅰ抗；阳性对照用已知胃癌阳性切片。将96孔板中培养细胞在加药后5h或 10h收获，戊二醛固定，分别石蜡切片（HE染色）、常规制作超薄切片和铀铅染色，用光镜和JEM100XⅡ型电镜观察。

1.3 统计学处理 利用北航医学图象分析管理系统软件，每组记数100个阳性细胞检测其着色灰度，以灰度表示着色深浅（深者灰度值低，浅者灰度值高）。SPSS软件进行方差分析后，进行独立样本t检验。

2 结果。

2.1 胃癌细胞形态和超微结构的变化 HE染色后光学显微镜下观察对照组BGC823细胞呈梭形、多边形；胞核多位于中央，呈圆形、椭圆形，染色呈紫兰色，其边界清晰，核仁可见，胞质均匀，多呈弱嗜酸性。实验组5h组BGC823癌细胞的胞质突减少，甚至消失，很多细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多，少数癌细胞膜已不完整，胞质溢出，胞核处于偏位；胞核多呈固缩状态，着色较深。实验10h组，大部分癌细胞胞质消失，裸核多见，少部分癌细胞质水肿，HE染色时胞核固缩。

电镜下5h组，局部细胞器减少，主要是线粒体和游离核糖体减少，胞质中有低密度电子空泡出现，并见扩张的内质网出现。10h组，线粒体水肿基质变空，嵴变短或消失，可见巨大线粒体及膜断裂；滑面内质网囊泡及分支小管增多，甚至呈灶状聚集；粗面内质网核糖体减少或缺如，可见池内隔离；次级溶酶体增多；有些细胞质膜断裂或缺损，使胞核裸露。