复方贞术调脂胶囊对大鼠非酒精性脂肪肝的影响
作者：陈芳超,郭姣,杨超燕,龚梦鹃,卢晓萍,唐春萍。
【摘要】 目的 探讨复方贞术调脂胶囊对大鼠非酒精性脂肪肝的影响,为其临床用药提供依据。方法 取SD大鼠60只,随机分成正常组、模型组、复方贞术调脂胶囊高、中、低组、非诺贝特组。除正常组外,其他组采用高脂乳剂灌胃复制大鼠非酒精性脂肪肝模型,造模同时复方贞术调脂胶囊高、中、低组、非诺贝特组连续给药8周后,测定肝脏胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）,并计算肝指数,光镜下观察肝脏病理学变化。结果 复方贞术调脂胶囊能降低肝脏TC和肝指数。肝脏病理切片结果显示复方贞术调脂胶囊组肝细胞脂肪变性、水样变性及坏死和炎症细胞浸润等病理表现均有所减轻,明显轻于模型组。结论 复方贞术调脂胶囊对非酒精性脂肪肝有较好的防治作用。
【关键词】 复方贞术调脂胶囊 非酒精性脂肪肝 病理 肝指数 Abstract:Objective To study the effects of compound Zhenzhu Tiaozhi capsules on nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) in rats. Methods 60 SD Rats were randomly divided into 6 groups: normal group, model group, compound Zhenzhu Tiaozhi capsules high dose group, moderate dose group, low dose group, and the fenofibrate group. Rats model with nonalcoholic fatty liver disease were established with administration of high fat emulsion by gavage. The rats in the treatment groups were administered with test drugs．After 8 weeks，liver cholesterol (TC), triglyeride (TG) were determined and liver index was calculated. Pathological changes in liver were observed by light microscopy. Results The liver TC and liver index of the rats administered with compound Zhenzhu Tiaozhi capsules were significantly reduced, and pathological changes were significantly ameliorated in the rats administered wit compound Zhenzhu Tiaozhi capsules. Conclusions Compound Zhenzhu Tiaozhi capsules has better therapeutic effects on nonalcoholic fatty liver disease in rats．。
Key words:compound Zhenzhu Tiaozhi capsule; nonalcoholic fatty liver; pathology; liver index。
近年来,随着人们饮食结构、生活方式的改变,肥胖症、糖尿病、高脂血症患者日益增多,导致非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver，NAFL）的发病率也逐年增加,已成为现今社会的多发病、常见病［1］。研究表明：NAFL在较短期内可发展为不可逆的肝损害,其肝纤维化的发生率高达25％［2］。因此积极发现和防治脂肪肝对阻止慢性肝病进展有着十分重要的意义。 脂肪肝多伴有高脂血症,大部分需要降血脂治疗［3］。复方贞术调脂胶囊为我院郭姣教授经验方, 临床具有较好的降血脂疗效。该组方已获得国家发明专利授权(ZL2004100512504）,前期实验中已证实复方贞术调脂胶囊具有调节血脂代谢异常作用,对高脂血症有防治作用［4］。在此基础上，本实验旨在进一步探讨复方贞术调脂胶囊对高脂饮食诱导的NAFL大鼠肝脏脂质和肝脏病理学形态变化的影响,为临床治疗非酒精性脂肪肝提供科学依据。
1 实验材料。
1.1 主要试剂 脱氧胆酸钠:国药集团化学试剂有限公司,批号F20070521；丙硫氧嘧啶:广东华南药业有限公司,批号070501；胆固醇:天津大茂化学试剂厂,批号20070518； 吐温80:上海申宇医药化工有限公司,批号061201；1,2丙二醇:广州化学试剂厂,批号2005/2031； TC试剂盒: 中生北控生物科技股份有限公司,批号070471； TG试剂盒:中生北控生物科技股份有限公司,批号071761。
1.2 药物 复方贞术调脂胶囊:1.74 g生药/粒,由广东药学院药物研究所提供；非诺贝特:法国利博尼制药公司,批号:90383。
1.3 仪器 FA2104型上皿电子天平:上海精密科学仪器有限公司；TG16GA高速离心机:上海安亭科学仪器厂；UV1800型紫外可见光光度计:北京瑞利分析仪器公司；DKS26型电热恒温水浴锅:上海精密实验设备有限公司；显微镜: Olympus cx21。
1.4 动物 SPF级SD大鼠,由广东省医学实验动物中心提供,合格证号:2007A003。
2 方法。
2.1 高脂乳剂的制备 制备方法根据文献［5］报道方法加以改进。取25 g猪油,加热到100 ℃左右使其溶解,加入10 g胆固醇,搅拌至完全溶解;再加入1 g丙硫氧嘧啶和25 mL吐温80,充分搅匀。在另一烧杯中加入蒸馏水30 mL和 1,2丙二醇20 mL,加热至60 ℃,加入脱氧胆酸钠2 g,充分搅拌直至溶解。将两种溶液充分混匀,制成高脂乳剂。
2.2 动物分组 取60只SD大鼠,体质量180～220 g,随机分为6组,每组10只，即正常组、模型组、复方贞术调脂胶囊高剂量组（6.4 g生药/kg）、中剂量组（3.2 g生药/kg）、低剂量组（1.6 g生药/kg）和非诺贝特组（40 mg/kg）。除正常组自由摄取普通饲料外,其余组分别在此基础上每天上午按10 mL/kg量灌胃给予高脂乳剂,4 h后各给药组分别灌胃相应药物,正常组、模型组给予等量生理盐水,连续给药8周。
2.3 检测指标及检测方法。
2.3.1 肝指数和肝组织病理形态学检查 末次给药1 h后,脱臼处死大鼠,立即摘取肝脏,用冰生理盐水清洗,滤纸吸干,用分析天平称其湿重后,计算肝指数（肝指数=肝湿重/体质量×100）。再在肝左叶取一块3 cm×3 cm肝组织,用10％（φ）甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片、HE染色,光学显微镜下观察细胞脂肪变性程度。肝脏细胞脂肪变性按以下标准判断 ［6］：低倍镜观察含脂滴细胞数与总细胞数，二者比值划分为0,1/3,1/3～1/2,1/2～2/3,2/3,相应脂肪病变等级为（—）、（+）、（++）、（+++）、(++++),若含脂滴细胞数与总细胞数之比值1/3即诊断为脂肪肝，其中占肝小叶1/3～1/2为轻度脂肪肝；占肝小叶1/2～2/3为中度脂肪肝；占肝小叶2/3以上或肝细胞弥漫脂肪变性呈鱼网状为重度脂肪肝。
2.3.2 肝脏脂质测定 称取相同部位肝脏组织0.5 g,并剪碎,用提取液(氯仿∶甲醇=1∶1体积比)制成匀浆后，提取液定容至5 mL,混匀。经24 h震荡抽提, 3 000 r/min离心5 min得上清液,分别采用氧化酶法、磷酸甘油酶法测定肝脏中TC、TG。
2.4 统计学处理 用SPSS 10.0统计软件进行统计,数据以±s表示,各组间比较采用方差分析,等级数据用Ridit分析,P0.05为差异有显著性。
3 结果。
3.1 复方贞术调脂胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理的影响。
3.1.1 肉眼观察 正常组大鼠肝脏外观正常,颜色鲜红,有弹性,被膜光滑,无病变迹象。模型组动物肝脏体积明显增大,包膜紧张,边缘变钝,表面无光泽,呈局灶性黄白色变性灶,切面有明显油腻感,呈奶黄色，呈典型脂肪变。复方贞术调脂胶囊高、中剂量组较模型组有明显改善,肝脏颜色、质地均接近正常。复方贞术调脂胶囊低剂量组较模型组有所改善,肝脏颜色偏黄,有一定光泽度,肿胀程度较模型组轻,切面有油腻感。非诺贝特组体积增大,质地较脆。
3.1.2 光镜观察 正常组：大鼠肝小叶结构明显,汇管区清晰可见,肝细胞索呈放射状排列,肝窦正常,中央静脉内皮细胞清晰可见,肝细胞形态规则,呈多边形整齐排列,胞浆染成红色,均匀。肝细胞核位于细胞中央,胞核清晰。肝细胞无变性。 模型组：肝组织有明显脂肪变性和水样变性，肝小叶结构不明显,肝索完全解离,肝窦狭窄或消失,中央静脉扩张,内皮细胞缺失。肝细胞肿大,细胞核被挤压变形,部分严重者脂滴融合,将细胞核挤到细胞一边、部分消失。胞浆染色不均匀,部分消失,充满大量脂肪空泡。间质组织中有炎症反应,局部有淋巴细胞和浆细胞的浸润。 复方贞术调脂胶囊高、中剂量组较模型组脂肪变性和水样变性程度明显减轻,炎症反应减轻,肝小叶结构仍可见,肝索轻微变形,只有部分肝细胞水样变性,大部分肝细胞接近正常形态。
复方贞术调脂胶囊低剂量组、非诺贝特组较模型组脂肪变性程度和水样变性减轻,肝小叶不明显,肝窦变窄或消失,部分细胞水样变性,非诺贝特组有少数动物肝细胞内有脂滴空泡。见图1。
3.1.3 复方贞术调脂胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏细胞脂肪变性情况的影响 结果表明：复方贞术调脂胶囊高、中、低剂量组以及非诺贝特组均能改善肝脏组织病变,与模型组比较差异有显著性（P0.05）。见表1。