3,4—二氨基苯基苯甲酮在基质辅助激光解析离子化质谱分析磷脂中的
摘 要 考察了3,4—二氨基苯基苯甲酮（DABP）作为基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）新型基质分析磷脂的能力。
与传统基质 2,4,6—三羟基苯乙酮（THAP）、2,5—二羟基苯甲酸（DHB）、—氰基—4—羟基肉桂酸（CHCA）相比，用优化后的DABP基质溶液体 系MeOH—H2O—HCl（80∶20∶3，V/V）分析不同种类的磷脂，可以有效抑制碱金属离子加成现象，得到单一的质子加成峰。
样品信号强，所需 激光能量低，卵磷脂（PC）的检出限可达到500 fmol。
在实际样品鸡蛋和大豆提取物分析过程中，DABP基质对磷脂分子具有良好的分辨率，碎片峰少，谱图背景干净，样品制备方法简单省时。
关键词 基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱；基质；3, 4—二氨基苯基苯甲酮；磷脂 1 引 言 脂类和磷脂分子，是除蛋白、核酸、多糖外的极其重要的生物大分子、。
脂类组学 （Lipidomics）是近年来新提出的组学概念，可以定义为确定细胞中的全部脂类种类以及所有脂类在脂类代谢、细胞信号转导、转录和翻译过程、基因 调控中的生物学作用、。
采用高灵敏和高通量的技术手段，主要是质谱技术，检测脂类在生命过程中的系统变化，研究这些变化在信号转导、调控、代谢等 各种生命过程中的作用和规律。
代写论文 基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）具有分析简便迅速、样品要求低、高灵敏度、高可重复性及抗杂质干扰能力强等 优点，广泛应用于蛋白、多肽以及核酸的分析中，但在脂类分析领域中应用较少。
有证据表明，MALDI技术是脂类组学中分析脂类的有用工具，尤其是分 析生物组织或细胞提取物的脂类组成、。
尽管MALDI技术发展日益成熟，但对于实际样品的分析，合适基质的选择仍基于经验的积累。
DHB和CHCA 在蛋白和多肽的分析上已经被证明是较好的MALDI基质，且DHB也被应用于脂类分析中、。
离子液体型MALDI基质也被应用于脂类分析，与传统固体基质DHB相比，可以提高样品点的均匀性、信号强度及重现性、。
与MALDI分析肽段时相比，分析脂类时碱金属离子加成现象十分严重，影响脂类分子的定性和定量分析。
另外，不同结构的脂类分子存在质量重 叠，影响结构鉴定、。
为了解决这些问题，常用薄层色谱（TLC）、及高效液相色谱（HPLC）、等技术对脂类样品进行预处理。
但处理过 程繁琐，并会造成样品损失。
3,4—二氨基苯基苯甲酮（DABP）是一种既含有氨基又含有羰基的 化合物，它在MALDI—TOF—MS分析中成功用于蛋白、多肽以及核酸的分析、。
本研究以DABP为基质，用于磷脂的MALDI质谱分析，系统考 察了其分析磷脂的能力。
结果表明，本方法不仅能降低碱金属离子的加成，而且还能提高离子信号强度，增强样品解吸离子化能力。
DABP作为MALDI基质分 析磷脂具有可行性和良好的应用前景。
毕业论文 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 Autoflex飞行时间质谱仪（德国Bruker公司）; DABP和THAP（美国Acros Organics公司）; CHCA和DHB（美国Sigma公司）; 卵磷脂（PC）、磷脂酸（PA）和磷脂酰苏氨酸（PS）（美国Sigma公司）; 大豆磷脂软胶囊（山东鸿洋神海洋生物技术有限公司）; 甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司），HCl（优级纯，12 mol/L，天津科密欧化学试剂有限公司），其它试剂均为分析纯。
二次去离子水经过Mill—Q水纯化系统处理。
鸡蛋购于当地市场。
2.2 实验方法 将磷脂标准品（PC, PA和PS）溶在氯仿—甲醇（50∶50，V/V）溶液中，超声1 min， 终浓度为100 ?SymbolmA@ mol/L。
应注意的是磷脂样品溶液要配制在玻璃瓶中，以避免有机溶剂与塑料制品作用产生的分子影响质谱分析、。
DABP配制成20 mmol/L的甲醇—水（80∶20，V/V）溶液，并加入3%（V/V） HCl。
THAP, DHB和CHCA配制成20 mmol/L的甲醇溶液。
样品溶液与基质溶液以1∶1（V/V）混合， 0.5 ?SymbolmA@ L混合溶液沉积在MALDI质谱的靶上，自然干燥，置于质谱仪器的离子源中进行质谱分析。
代写论文 2.3 MALDI—TOF MS分析 Autoflex飞行时间质谱仪安装有337 nm氮气激光源。
实验中所获得的质谱数据都是在线性模式下得到的, 质谱质量数采用外标法进行校正。
加速电压范围在－20 kV～＋20 kV。
3 结果与讨论 3.1 DABP基体溶液体系的优化 DABP分子量为212.25，在正离子检测模式下，在m/z 212.9处的峰为、＋峰，m/z424.3处为、＋峰，m/z 407.4处为 、＋峰。
离子化的基质能更好地吸收激光能量，将其传递给样品分子，使样品分子获得足够的能量，信号强度不仅加强，而且由于所需激光能量降低，减少了分 子碎片峰。
在20 mmol/L DABP—甲醇溶液中，分别按体积比3% 加入12 mol/L HCl, 16 mol/L HNO3, 18 mol/L H2SO4和4 mol/L H3PO4溶液进行酸化。
根据MALDI的原理，分析物首先与大量基质分子混合，干燥后形成固体晶体。
加入H3PO4和H2SO4酸化后，基质和样品混合溶液 在靶子上未形成结晶，MALDI实验未观察到样品分子的信号。
在同等激光能量强度下，将DABP—甲 醇溶液和加3%（V/V） HCl的DABP—甲醇溶液用于分析磷脂标准品（DMPC，分子量677.94）, 见图1。
图1b的样品信号强度显著增强，说明基质溶液离子化确实能增强样品信号强度。
考虑到基质溶液体系中水的存在使点样时溶液容易形成液滴直接点在靶子上，这样枪头不易碰到靶子上影响结晶； 图1 不同的DABP溶液体系对磷脂样品（DMPC，分子量677.940）分析的MALDI质谱图 Fig．1 MALDI mass spectra of 1,2—dimycistoyl—sn—glycero—3 （DMPC）（MW＝677.940） a. diaminobenzophenone (DABP) in methanol solution; b. 3% HCl acidification of DABP in methanol solution as matrices 但若水含量太多，将会延长干燥时间，导致不均相的结晶，影响质谱分析、。
因此，水的比重以20%左右为宜，经过优化的DABP体系中的溶液组成为MeOH—H2O—HCl（80∶20∶3，V/V）。