蜂胶对不同龋敏感者变形链球菌临床分离株产酸影响的体外实验研究
【摘要】 目的 研究蜂胶提取物对不同龋敏感者口腔变形链球菌临床分离株的产酸能力的影响。方法 以BHI液体培养基为溶剂,分别配制pH=7.0的5 g/L 和1.25g/L水溶性蜂胶溶液,1.5625 g/L醇溶性蜂胶溶液,并以空白液体培养基作为对照,加入高龋组，无龋组，国际标准株变形链球菌，厌氧培养48 h 后离心,用精密酸度仪测定上清的pH值，计算出△pH，并进行比较。结果 高龋组和国际标准株产酸能力明显高于无龋组；醇溶性蜂胶溶液和水溶性蜂胶溶液皆可使变链菌产酸能力降低,蜂胶各组与对照组相比差异均有统计学意义(P 0.05) 。醇溶性蜂胶溶液和5 g/L 水溶性蜂胶溶液降低产酸能力的作用比较差异无统计学意义(P 0.05)，但是均明显高于1.25g/L水溶性蜂胶溶液；蜂胶对高龋组和无龋组细菌的影响没有显著性差异。结论 蜂胶提取物影响变形链球菌的代谢,使变形链球菌产酸能力降低。
ABSTRACT Objective To study the effect of propolis on acid producing ability of clinical isolates from strptococcus mutans of the patients with difference caries susceptibility. Methodss Strptococcus mutans from caries—active group，caries—free group and international standard strain group were put into BHI culture medium with 5g/L and 1.25g/L proplis extract in water，into BHI with 1.5625g/L proplis extract in ethanol and into BHI culture medium which was taken as the control; after anaerobic culture for 48 hours，centrifugation was made，the pH value of supermatant in each solution was detected with acurate acidity tester and △pH was calculated; the results were compared. Results Acidogenencity of caires—active group and of international standard strain group was much higher than that of caries—free group; proplis extract in water or in ethanol decreased the acidogenecity of streptococcus mutans; the comparison of each group with proplis to the control was of statistical significance (Ｐ＜0.05); the effect comparison between the solution with proplis extract in ethanol and the solution with 5g/L proplis extract in water in decreasing acidogenecity was of no statstical significance while their effects in decreasing acidogenecity were obiously stronger than that of the solution with 1.25g/L proplis extrat in water; the effect of proplis in caries—active group was without significant difference from that in caries—free group. Conclusions Proplis extract can affect the metabolism of streptococcus mutans and decrease its acidogenecity.
KEYWORDS proplis streptococcus mutans caries susceptibility acidogenecity。
龋病是世界范围内的常见病和多发病，其发病率高，危害性大，被世界卫生组织列为要重点防治的三大疾病之一［1］。变形链球菌（变链菌）是公认的主要致龋菌之一。近年来对蜂胶的研究比较多，本实验通过观察蜂胶对不同龋敏感患者口腔变形链球菌临床分离株产酸的影响，从而探讨蜂胶作为一种生物防龋制剂的可行性，为其临床使用提供实验依据。
1 材料和方法。
1.1 材料 蜂胶：乐山锡诚集团提供。细菌: 自行分离、鉴定自不同龋敏感患者口腔中的变形链球菌63株，其中高龋组34株，无龋组29株（高龋者dmft≥6，无龋者dmft＝0）。国际参考菌株变形链球菌（S．mutans）ATCC 25175（血清型C），由四川大学华西医学院口腔生物工程重点实验室提供。
1.2 菌液的制备 将甘油保种变形链球菌临床分离株与国际标准株分别接种于MS固体培养基，37℃，微需氧复苏48h，检查生长状况，镜检鉴定无污染后，挑取单个菌落转种于BHI 液体培养基增菌，厌氧（80%N2、10%H2、10%CO2）培养24h，涂片检查为纯培养后，将菌液在4℃下以3000r／min离心15min，弃上清，收集细菌，无菌生理盐水洗菌两次，用无菌生理盐水调整为于紫外分光光度计540 nm处吸光度A=1.0的菌悬液，备用。
1. 3 试剂的制备 以pH为7.0的BHI 培养基为溶剂，配制醇溶性蜂胶溶液(1.5625g/L)，水溶性蜂胶溶液(5g/L 和1.25g/L)，调定各培养基的pH值为7.0 。
1. 4 实验方法 实验为4组：5 g/L蜂胶水溶液组，1.25 g/L蜂胶水溶液组,1.5625 g/L蜂胶醇溶液组，BHI培养液组做为对照。取各菌株的菌悬液，按菌液与液体培养基1∶10 (v/v) 比例接种细菌，37℃厌氧培养（80%N2、10%H2、10%CO2）48 h， 3000rpm，离心15 min，收集上清,采用 pHS — 3C精密酸度计，测定培养物上清的终末pH 值,并计算pH的变化值△pH值（初始pH 值－终末pH 值）。
1. 5 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件中的two—way ANVOA对不同细菌的产酸能力即△pH值，进行统计分析(а=0.05)；并采用kendall相关分析法检测蜂胶与细菌产酸能力之间的相关性。