紫杉醇长效注射缓释微球的体内外评价
【摘要】 目的:制备以PLGA为载体材料的紫杉醇长效注射缓释微球，并对其体内外释药 规律 、抑瘤效果等进行评价。方法:使用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇长效缓释微球，通过分析粒径分布、包封率、体外释放效果、白细胞水平及体内抑瘤效果等指标，对其进行评价。结果:所得微球平均粒径小于10μm，包封率大于80%，体外能持续释放30d。对裸鼠体内的前列腺PC—3M肿瘤的抑制率为60.35%。结论:以PLGA为载体材料制备的紫杉醇长效缓释微球提高了紫杉醇的溶解性，延长了药物的释放时间，并在体内长时间有效抑制肿瘤的生长速度，具有较好的抑瘤效果和较低的血液毒性。
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紫杉醇是一种从太平洋红豆杉树树皮中提取的有效抗肿瘤药［1—2］ 。本文研究的目的是制备一种以生物可降解聚合物PLGA［poly（D，L—lactic—co—glycolic acid）］为材料的紫杉醇微球，这种微球体外释放长达30d，体内注射28d后，未表现出明显的血液毒性。 治疗 荷PC—3M肿瘤裸鼠20d可以有效抑制肿瘤细胞生长，抑瘤率为60.35%。 论文代写。
1 材料与方法 1.1 材料 紫杉醇购自重庆美联制药有限公司;PLGA（75.25，50.50，M.W.10000～40000）购自山东省医疗器械研究所;聚乙烯醇（PVA），吐温80、吐温20、二氯甲烷（DCM）和乙腈均购自于北京化学试剂公司。 1.2 紫杉醇微球的处方筛选 采用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇微球。适量紫杉醇和PLGA溶解于DCM中，此溶液保存于4℃以防止DCM的挥发。将此溶液逐滴加入至20ml高浓度的PVA溶液中，高速搅拌1min。之后将外水相稀释至2%（w.v）的浓度，于室温以300r.min的速度持续搅拌2h，挥发掉DCM。然后将该溶液冷冻离心10min，弃去上清液，蒸馏水反复洗涤沉淀，最后冷冻干燥。 1.3 微球的物理性质 粒径的测定:用激光粒度分析仪（OMEC Ls800， 中国 珠海欧美克公司）测量粒子大小。微球电镜扫描:获得的微球通过电镜（JE—OL，JSM—5600LV）扫描得到其外部形状和表面特征。 微球中紫杉醇含量的测定:用HPLC分析测定PLGA微球中包含的紫杉醇含量。取3mg紫杉醇微球溶解于1ml的DCM，之后再加入5ml的乙腈:水（50:50，v.v）的溶液，并涡旋振荡混匀。通入氮气挥去DCM之后，用HPLC分析。 1.4 体外药物释放实验 将适量载药微球混悬于10ml的磷酸盐缓冲液（PBS，PH7.4）中，其中还含有吐温80、吐温20和叠氮钠。将装有该混悬液的瓶子置于恒温37℃水平振摇，振摇幅度6cm，速度100r.min。在指定的时间点，将每批微球的3个样品取样，冷冻离心分离。将得到的微球重新用10ml新的介质混悬后，继续振摇。离心所得上清液，用上面描述的HPLC方法测定释放的药量。
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1.5 微球的血液毒性评价 1.5.1 实验动物 18～20g雄性昆明鼠，购自军事医学 科学 院实验动物中心。定时投食，自由饮水。
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1.5.2 给药方式及分组 每组6只小鼠，每组平均体重相差不超过1g。治疗组中分为载药微球组和市售紫杉醇注射液（Taxol）给药组，对照组为生理盐水注射组。微球组皮下注射，Taxol组和生理盐水组静脉给药。给药剂量 参考 Taxol的临床给药剂量，3组均为175mg.ml。 1.5.3 白细胞的测定 于给药前、给药后7、14、21、28d，分别将每只小鼠割尾静脉取血20μl，用Sysmex F—820半自动血细胞分析仪（日本东亚公司）测量每只动物的白细胞数。 1.6 紫杉醇缓释微球的体内抑瘤实验。
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1.6.1 实验动物及细胞 4～6周龄雄性裸鼠，购自军事医学科学院实验动物中心;前列腺PC—3M肿瘤细胞，购自北京大学医学部病理研究所。 1.6.2 动物分组及给药方式、剂量 每组7只裸鼠，每组平均体重相差不超过1g。治疗组中分为载药微球组和市售紫杉醇注射液（Taxol）给药组，对照组分为生理盐水注射组。微球组和生理盐水注射组均在瘤旁注射，Taxol组分别静脉注射和瘤旁注射。给药剂量参考Taxol的临床给药剂量，3组均为175mg.ml。 1.6.3 抑瘤率测定 待治疗10d后处死裸鼠，完整剥离皮下肿瘤移植物，称重，并按照下列公式 计算 抑瘤率。瘤重抑制率%=（1—T.C）x100%，（C为对照组平均瘤重，T为治疗组平均瘤重）。 1.7 统计学处理 数据经SAS6.12统计软件进行组间t检验。
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2 结果 2.1 紫杉醇微球的处方筛选 2.1.1 PLGA分子量对包封率的影响 PLGA作为微球的主要骨架材料，其分子量直接影响到微球的包封率。PLGA分子量越高，其黏度随之提高，包封率也升高。 2.1.2 乳酸.羟基乙酸（LA.GA）不同比例对包封率的影响 相同分子量的PLGA由于其乳酸.羟基乙酸的比例不同而影响到微球的包封率。随着乳酸在PLGA中所占比例的增加，材料的疏水性增加，包封率升高。 2.2 优化工艺验证 采用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇微球，包封率大于80%，所得微球平均粒径为2.6μm，粒子基本呈正态分布。外观圆整，表面分布零星空洞。 毕业论文。