不同溶剂海芋提取物的体外抗肿瘤活性研究
【摘要】 目的研究海芋不同溶剂提取物的抗肿瘤作用。方法体外抗肿瘤活性研究采用MTT比色法，靶细胞采用人肺癌细胞株A549、黑色素瘤细胞株B16、人胃腺癌细胞株BGC—823、神经肿瘤细胞株NG108—15。结果海芋醋酸乙酯提取物对A549，B16，BGC—823的IC50分别为94.6， 541.9，629.5 μg·ml—1,丙酮提取物对A549，B16的IC50分别为40.9，438.0 μg·ml—1，而海芋的环己烷，石油醚，乙醇，水提物对各种细胞株的IC50剂量都比较大。海芋的丙酮和醋酸乙酯提取物分别在60 g·kg—1和36.5 g·kg—1的给药剂量下没有显示明显的急性毒性。结论醋酸乙酯和丙酮提取物有较好的细胞毒活性，没有明显的急性毒性，这两部分有较好的抗肿瘤前景。
Abstract：ObjectiveTo study the anticancer effects of different solvent extracts from Alocasia macrorrhiza in vitro.MethodsMTT method was used to detect the survival of tumor cells treated with diffenent solvent extract from Alocasia macrorrhiza in vitro, tumor cell A549, B16, BGC—823, NG108—15 was used as target cell. ResultsThe IC50 of the ethyl acetate extract from Alocasia macrorrhiza to A549, B16, BGC—823 were 94.6, 541.9,629.5 μg·ml—1 respectively，and those of the acetone extract from Alocasia macrorrhiza to A549 and B16 40.9,438.0 μg·ml—1 respectively. But there were quite large dosages of the IC50 of the extracts of cyclohexane, benzine, ethyl alcohol and water from Alocasia macrorrhiza to all kinds of cell lines. The obvious acute toxicities were not observed for the ethyl acetate and acetone extracts of Alocasia macrorrhiza under the treatment doses of 60g·kg—1 and 36.5 g·kg—1 respectively.ConclusionThere is good cytotoxicity of the ethyl acetate and acetone extracts from Alocasia macrorrhiza to tumor cells, and no obvious acute toxicity has been observed. Therefore these two parts have good anti—tumor prospects.
Key words：Alocasia macrorrhiza; Extract; Anticancer; Activity。
海芋，别名广东狼毒、野芋、独脚莲、老虎芋等，为天南星科植物海芋Alocasia macrorrhiza(L.)Schott的干燥根茎，首载于《本草拾遗》，原称天荷。《本草纲目》始称为海芋，是岭南地区常用民间草药。《本草纲目》记载其主治“疟瘴毒肿风癞”，“可以治疠”［1］。《分类草药性》载其能“治一切恶疮肿毒”。《广西中药志》总结近代临床经验，载其可治“肺结核、痧症、热病等”［2］。本品有清热解毒、消肿散结之功。现代临床用于高热、流感、风湿痛、疮疡肿毒、蛇虫咬伤等病症。近年来，民间也用海芋治疗恶性肿瘤。经上海中医药大学的可燕等［3］调查了解，目前上海市及其邻近地区各中药店、中医院出售的作“蛇六谷”使用的中药原植物均为海芋的根茎。蛇六谷广泛用来治疗各种肿瘤，如上海群力草药店用其治疗胃癌、胃腺癌、鼻咽癌、乳腺癌等，名中医陆德铭教授用其治疗乳腺癌［4］。所有这些资料表明，海芋中有对肿瘤有较好活性的化合物，所以本文对海芋的多种溶剂提取物进行了体外细胞毒活性测定，寻找有效的活性部位，并测定了活性较好的部位的急性毒性，为将该提取物开发为有效的抗肿瘤药物奠定了基础，同时为寻找海芋中的活性单体化合物指明了方向。
1 材料。
海芋采自云南省勐腊县勐仑镇，经中国科学院西双版纳热带植物园任盘宇老师鉴定为Alocasia macrorrhiza (L.) Schott。作为药材用其根部。人肺癌细胞株A549、黑色素瘤细胞株B16、人胃腺癌细胞株BGC—823、神经肿瘤细胞株NG108—15均购自中科院上海细胞库。植物提取、分离过程中用到的溶剂均为分析纯，为天津元立公司产品；MTT(四氮唑)为Sigma公司产品；FBS(胚胎牛血清)为美国Hyclone公司产品；RPMI1640和DMEM培养基为美国Gibco公司产品；Trypsin(胰蛋白酶)为上海林叶生物科技有限公司产品。
2 方法。
称取干燥的海芋根部1 500 g，将其在粉碎机上粉碎，然后从中取1 200 g，以每份200 g等分为6 份，分别用环己烷、石油醚、醋酸乙酯、丙酮、乙醇、水为溶剂进行提取，每种溶剂提取方法如下：用800 ml溶剂和药材混匀，然后将其放在恒温震荡水浴锅上进行提取，温度控制在50℃，同样的溶剂用量提取两次，12 h/次，合并提取液，然后不高于50℃用旋转蒸发仪将其蒸干，得各种溶剂的海芋提取物，然后在真空干燥箱中继续烘干至恒重。
2．2 MTT法测定。
细胞培养条件为：37℃，5 %CO2 ，含10 %小牛血清的RPMI 1640 培养基。用胰蛋白酶消化癌细胞，以配制细胞悬液,浓度为1×107 cell·L —1，于96 孔培养板内每孔接种100 μl(每孔含1 000个细胞)。用培养基配制样品，设4个浓度：0.1，1，10，100 μg·ml—1 ，每组设3 个平行孔，每孔加样0.1 ml。置孵育箱中培养96 h 后弃去培养液，每孔加入0.5 % MTT 溶液0.1 ml 。37℃保温4 h ，弃上清液，每孔加入DMSO 0.1 ml，振荡混匀，用酶标仪检测(参比波长450 nm ，检测波长570 nm) ，以下式计算药物对细胞生长的抑制率： 细胞生长抑制率 (%)=(1 — A样品组/A对照组) ×100 %。
以SPSS 10.0 软件计算IC50。