穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究
作者：于海荣， 王济兴， 张风英， 陈建双， 宋鸿儒 论文代写。
【关键词】 穿山龙总皂苷；,,T淋巴细胞增殖;,,白细胞介素 论文代写。
摘要：目的用血清药 理学 方法 研究 穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的 影响 ，探讨其可能的作用机理。方法用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清（分别在培养系中加入20%，10%，5%含药血清）对Con A诱导脾淋巴细胞增殖的影响；用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对Con A诱导脾淋巴细胞分泌IL2影响。结果20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞增殖（P0.01, P0.05），20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL2（P0.01,P0.05）。结论穿山龙总皂苷含药血清可抑制Con A诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL2的产生。
关键词：穿山龙总皂苷； T淋巴细胞增殖; 白细胞介素2； 血清药理学。
The Pharmacological Study of Whole Saponin of Rhizoma Dioscoeae Nipponicae Effect on Rats‘ T Lymph Cell Function。
Abstract：ObjectiveTo study the effect of whole saponin of Rhizoma Dioscoeae Nipponicae on rats`spleen lymph cell‘s proliferation and its excreting IL2.MethodsBy MTT means, the way that the serum of different concentrations of whole saponin of RDN affect Con A‘s stimulating spleen lymph cell`s proliferation were measured. By double—antibodies—ELLISA means, the ways that serum of different concentration of RDN act on Con A‘s stimulating spleen lymph cell‘s excreting IL2 were measured as well.ResultsThe serum of 20% and 10% whole saponin of RDN lowered Con A‘s stimulating spleen lymph cell‘s proliferation (P＜0.01,P＜0.05). The serum of 20% and that of 10% of whole saponin of RDN could lower Con A‘s stimulating spleen lymph cell‘s excreting IL2 (P＜0.01,P＜0.05).ConclusionThe serum of whole saponin of RDN can lower Con A‘s stimulating the proliferation and excretion of IL2 of rats‘spleen lymph cell. 论文代写。
Key words：Whole saponin of Rhizoma Dioscoeae Nipponicae； Tlymph cell proliferation； Interleukin2； Serum pharmacology 穿山龙又名穿地龙，野山药，为薯蓣科多年生藤本植物穿山龙薯蓣根茎。民间多用其浸酒或煎服， 治疗 风湿性关节炎、类风湿关节炎、过敏性皮炎等均有显著疗效。由于上述几种疾病发病机制与免疫功能紊乱有关，考虑其可能具有以免疫抑制为主的免疫调节作用。穿山龙总皂苷为其提取物，本实验研究也证实有良好的抗炎及免疫抑制作用，为进一步探讨其免疫抑制作用机理，本研究采用血清药理学方法，给大鼠灌服穿山龙总皂苷,采集其含药血清，加入到体外培养系中，观察穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的影响。 毕业论文。
1.1 药品与试剂穿山龙总皂苷，由承德市宽城皂素厂提供，实验时用含0.01%吐温—80的生理盐水研成混悬液使用；泼尼松，新乡市太利药业有限公司，批号010806为纯品原料药，实验时用含0.01%吐温—80的生理盐水研成混悬液使用。青霉素、链霉素、刀豆蛋白A均为 Sigma公司产品。L—谷氨酰胺、RPMI1640为GIBCO公司产品。大鼠IL2试剂盒：美国BIOSOURCE公司产品。四甲基偶氮唑蓝（MTT）瑞士FIUKA公司产品。二甲基亚砜（DMSO），Na2HPO412H2O，KH2PO4，NaCl，KCl，MgSO4H2O, MgCl2，CaCl2等均为国产 分析 纯。 论文代写。
1.2 动物健康成年Wistar大鼠，雌雄各半，体重160~180 g，由承德医学院动物室提供。
2 方法。
2.1 含药血清的制备取Wistar大鼠30只，随机分成三组：穿山龙总皂苷实验组，泼尼松阳性药物对照组和溶媒对照组，分别灌胃给以穿山龙总苷1 000 mg（kg・d）、泼尼松9 mg （kg・d）和含0.01%吐温80的生理盐水2 ml，1次/d，连续7 d，末次给药后1 h，眶后取血，离心后取血清 ，将每组10只大鼠血清混合，经56℃水浴灭活30 min， 0.22 μm微孔滤膜除菌制得穿山龙含药血清，泼尼松含药血清、溶媒血清备用。 毕业论文。
2.2 脾淋巴细胞悬液制备另取Wistar大鼠6只,无菌取脾，将6只大鼠脾细胞混合,双蒸水破坏红细胞，制备脾淋巴细胞悬液。 代写论文。
2.3 穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导的正常大鼠脾细胞增殖的影响（MTT法）穿山龙总皂苷含药血清设3个剂量组，分别为20%，10%，5%含药血清组，即在培养板每孔中加入穿山龙总皂苷含药血清分别为20%，10%，5%，每个浓度组分别设相应浓度的溶媒血清组和泼尼松含药血清对照。每组设6个复孔，每孔中加入3×106个/ml细胞悬液150 μl ，100 μg/ml的ConA 10 μl（终浓度为5 μg/ml）,20%，10%，5%血清组各加入相应大鼠含药或溶媒血清40，20，10 μl；每孔终体积不足200 μl的用RPMI1640补足。将培养板置5%的CO2培养箱饱和湿度37℃培养72 h。于培养结束前4 h，加入5 mg/ml的MTT溶液10 μl，置37℃5%CO2培养箱中继续培养4 h。取出培养板，每孔加入200 μl二甲基亚砜（DMSO），静置20 min，使紫色结晶呈完全溶解。取上清液150 μl于96孔培养板中，以无细胞悬液孔调零，570 nm处用酶标仪测OD值。