江苏地区不同类型乙型肝炎患者HBV基因分型研究

【关键词】 肝炎病毒,乙型；基因型；聚合酶链反应。

HBV genotyping in hepatitis B patients in Jiangsu province。

【Abstract】 AIM: To investigate the distribution of hepatitis B virus (HBV) genotypes of hepatitis B patients in Jiangsu province and analyze the relationship of HBV genotypes with the serum HBV DNA levels of patients. METHODS: The HBV genotypes and HBV DNA levels of 176 patients in Jiangsu province were detected by realtime quantitative PCR and Taqman MGB probe technology.RESULTS: Among 176 HBVinfected patients, the proportions of genotype C, BC mixedtype, B, A and D were 66.5%(117/176), 22.7%(40/176), 5.1%(9/176), 0.6%(1/176) and 0.6%(1/176), respectively. The results showed there were significant differences between genotype C and genotype BC mixedtype in HBV DNA load(P0.05), and the HBV DNA level of genotype BC mixedtype was significantly higher than that of genotype C. The rate of genotype C among the patients of chronic hepatitis B was 71.4%, higher than that among the patients of acute hepatitis B, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, but it showed no significant differences in the various clinical types of HBV infection tested(P0.05). CONCLUSION: Genotype C and genotype BC mixedtype are the two dominant genotypes in the patients in Jiangsu province, and genotype B, A, and D are also found, but not common. The HBV DNA load of genotype B, C mixedtype is significantly higher than that of genotype C.

【Keywords】 Hepatitis B Virus; Genotype; polymerase chain reaction。

【摘要】 目的： 了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征，探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系. 方法：采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术，对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测. 结果：176例血清中，C型117人（66.5%），B, C型40人（22.7%），B型9人（5.1%），D型1人（0.6%），A型1人(0.6%). C型与B, C混合型在HBV DNA水平上存在统计学差异（P0.05），B, C混合型的HBV DNA水平明显高于C型. C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例（71.4%）比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高，但差异无统计学意义. 结论： 江苏地区HBV基因型以C型为主, B, C混合型次之，B型较少，D型,A型极少；B, C混合型患者的HBV DNA数量水平高于C型.　　【关键词】 肝炎病毒，乙型；基因型；聚合酶链反应。

0引言　　　　乙型肝炎病毒(HBV)为一双链DNA病毒，主要引起急、慢性肝炎、肝硬化和肝癌，其基因序列高度变异，目前HBV已分为A～H 8种基因型［1］，HBV基因型呈一定的地域性分布. 国外研究发现，HBV基因型与临床表现、预后、治疗应答均有一定关系，不同基因型具有不同的致病性，HBV基因型与肝癌发生率也存在一定相关性，HBV DNA水平与其基因型之间有无关系存在争议. 国内研究多集中在研究某地区乙型肝炎患者HBV基因型的组成与分布上，关于HBV基因型与HBV DNA水平、肝病严重程度等之间的关系等方面的研究还比较少，研究结果也多存在争议. 本研究采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术，对江苏淮安地区176例乙型肝炎患者进行HBV基因分型和HBV DNA定量检测，探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系.

1材料和方法。

1.1材料176份HBV感染血清均于200509/200602采自江苏省淮安市第四人民医院门诊和住院患者，其中急性乙型肝炎19例，慢性乙型肝炎119例，肝硬化及肝癌38例. 其中，男性134例，女性42例，年龄10～77（平均年龄37.5）岁，诊断标准符合2000年第十次全国传染病与寄生虫病学会和肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案［2］. GeneAmpR5700 Sequence Detection System为美国PE公司产品. HBV基因分型荧光PCR检测试剂盒，由杭州博赛基因诊断技术有限公司提供； HBVPCR荧光定量检测试剂盒由上海复星医学科技发展有限公司提供，检测灵敏度为4.2×102 IU/L.　　1.2方法。

1.2.1HBV DNA定量检测HBV DNA浓度测定采用荧光定量PCR法，HBV DNA提取按操作说明.　　1.2.2HBV DNA基因分型检测血清标本50 μL加核酸提取液50 μL，振荡10 s. 100℃干浴10 min，14593 g离心10 min，上清液即可用作PCR反应的模板. 基因扩增时，取上清液4 μL分别加入含有36.4 μL各型基因型混合液的反应管中，混匀，14593 g离心数秒，反应管置于5700定量荧光仪上，反应条件为37℃×2 min，94℃×2 min；再按94℃×10 s→62℃×40 s，循环40次，荧光检测在62℃，荧光通道检测选择FAM.　　统计学处理： 计量数据以x±s表示，组间比较采用方差分析及LSDt检验. 计数资料组间比较采用χ2检验.

2结果。

2.1176例患者的HBV基因分型及其分布对江苏地区176例不同临床类型的HBV患者进行基因分型，本研究检测到5种类型的基因型，构成比由高到低依次为：C型66.5%（117/176），B， C混合型22.7%（40/176），B型5.1%（9/176），A型0.6%（1/176），D型0.6%（1/176），无法分型4.5%（8/176）. 因此，C型和B, C混合型是该地区HBV的优势基因型，B型较少，A型和D型都只检测到1例，没有发现E, G, H等基因型. 慢性乙型肝炎患者中的HBV基因型与急性乙型肝炎、肝硬化或肝癌患者中的相比，C基因型所占比例较高（71.4%），但经χ2检验，差异无统计学意义（P0.05）.