颈内静脉血浆ET、NO变化与脑缺血再灌损伤相关性研究

作者：夏瑞，卢娟，杨光，夏中元，侯望平。

【关键词】 内皮素。

【摘要】 目的 观察兔全脑缺血再灌（I/R）期间颈内静脉血浆ET、NO的动态变化及与脑I/R损伤的关系。方法 24只家兔随机分A、B、C三组，每组8只，C组在缺血前15min（I0）及再灌注30min（R1）、2h（R2）、4h（R3）四个时点，B组在前三个时点，A组在前两个时点采颈内静脉球部血样分别测定ET、NO及ET/NO比值的变化。取左颞皮质做HE、尼氏体染色，光镜观察，对神经元进行图像分析，测量核截面积和尼氏体平均光密度。结果 （1）NO在R1时显著增加（295%，P0.01），在R2、R3时缓慢下降。ET在R1～R3时持续上升，由317.58ng/L升至637.01ng/L。（2）ET/NO比值在R1时与I0时差异无显著性，在R2、R3时比值显著增大，由44.83×10—6/L～224.30×10—6/L。（3）B、C组的病理损伤比A组严重，C组又比B组严重。（4）B、C组的神经元核截面比A组显著降低，C组的核截面积最小。尼氏体平均光密度A组B组C组。（5）ET分别与核截面积及尼氏体平均光密度呈显著负相关。ET/NO比值与核截面积及尼氏体平均光密度呈非常显著负相关。结论 （1）ET增加是脑I/R损伤的主要原因之一，ET/NO比值失衡与脑I/R损伤程度更密切。（2）应用颈内静脉血动态检测ET和NO的变化来反映脑I/R损伤程度及预后有临床实用价值。

【关键词】 内皮素；一氧化氮；脑缺血再灌；颈内静脉血；尼氏体；核截面积 　　内皮素（ET）和一氧化氮（NO）是近年来发现的具有广泛生物效应的细胞因子，影响机体许多生理和病理过程。两者在缺血再灌（I/R）损伤中的作用备受关注。本文旨在探讨颈内静脉血浆ET、NO变化与脑I/R损伤程度的关系，为临床判断脑I/R损伤程度提供一个简便可行的检测方法和参考数据。

1 材料与方法。

1.1 手术经过和脑I/R模型的建立 实验动物在1%戊巴比妥钠30mg/kg+芬太尼10μg/kg静脉麻醉下，气管切开机械通气，保持PetCO2在35～45mmHg。全身肝素化后经股动脉置管，6导生理记录仪（Life scope 9日本光电公司）监测MAP、CVP、HR、PetCO2、ECG和鼓膜温度，利用电热毯保持鼓膜温度在37℃～39℃，经左颈内静脉逆行置管于颈静脉球处（约5cm）供采血用。按“六血管”式复制兔脑完全性缺血模型，观察期间静滴平衡液10ml/（kg・h）。

1.2 动物分组及采样时点 健康家兔24只，体重2.0～2.5kg，随机分为A、B、C三组，每组8只，缺血15min后分别再灌30min（A组）、2h（B组）和4h（C组）。C组在缺血前15min（I0）、再灌30min（R1）、2h（R2）和4h（R3）四个时点，B组在前三个时点、A组在前两个时点采血。

1.3 观察指标 （1）颈内静脉血浆ET和NO含量检测及ET/NO比值计算：在各组各时点采血4ml测定ET和NO浓度。ET测定方法按北方生物技术研究所提供的放免药盒说明书进行。NO用硝酸还原酶法测定其稳定代谢产品NO—2的水平，试剂盒由南京聚力生物医学工程研究所提供。根据测定的ET和NO数据。将各时点值分别累计，再依累计值计算ET和NO相应时点的比值。(2)组织学检查：各组在实验结束前取左颞皮层组织分别做HE、尼氏体染色，光镜观察。（3）神经元图像分析：用MPIAS—500彩色病理图文分析系统。以0.199μm像素点长，在1.09×104μm2测量窗下测神经元的核截面积。以0.389μm像素点长，在4.22×104μm2测量窗下测尼氏体的平均光密度。

1.4 统计学方法 所得数据全部输入数据库，采用统计包(SPSS 10.0)做方差分析和相关分析，P0.05为差异有显著性。

2 结果。

2.1 颈内静脉血浆ET、NO变化 NO浓度在A组R1、B组R1及R2和C组R1、R2及R3均较同组I0升高，各组中以R1时升高显著，随着再灌时间延长，B、C组呈缓慢下降趋势。ET在A组R1，B组R1、R2和C组R1～R3均较同组I0时升高，而且B组R2的ET值＞R1，C组的ET值R3＞R2＞R1，见表1。表1 颈内静脉血浆ET、NO变化（略)　注：与I0比较，△P＜0.05； *P＜0.01。