金荞麦药酒对胶原诱导关节炎模型大鼠?? IL―22、IL―18及TNF―α

【摘要】目的：观察金荞麦药酒对胶原诱导关节炎大鼠模型血清和滑膜细胞IL—22、IL—18、TNF—α的影响。

方法：将Wistar大鼠随机分成6组，空白组、模型对照组、金荞麦高剂量组、金荞麦中剂量组、金荞麦低剂量组、雷公藤多苷组，建立Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型，检测血清和滑膜细胞IL—22、IL—18、TNF—α的含量。

结果：与空白组比较，模型对照组血清和滑膜细胞IL—22、IL—18、TNF—α明显升高；与模型组比较，各给药组的上述指标均得到改善。

结论：金荞麦药酒治疗类风湿关节炎的机制可能与降低IL—22、IL—18、TNF—α有关。

毕业论文网 　　【关键词】金荞麦药酒；胶原诱导关节炎；白细胞介素—22；白细胞介素—18；肿瘤坏死因子—α 　　【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007—8517（2016）10—0016—02 　　Abstract：Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL—22，IL—18 and TNF—αof collagen—induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random：blank group， model group，high dose fagopyrum dibotrys group， low dose fagopyrum dibotrys group，and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen—induced arthritis （CIA） was established. The IL—22，IL—18，TNF—α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL—22，IL—18，TNF—α were increased，compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL—22，IL—18，TNF—α. 　　Keywords：fagopyrum dibotrys medicinal liquor；collagen—induced arthritis；IL—22；IL—18；TNF—α 　　金荞麦别名苦荞麦、荞麦当归、荞麦三七、金锁银开、贼骨头、铁拳头、土茯苓等；其性凉，味辛、苦，具有清热解毒、活血化瘀、健脾利湿的作用。

金荞麦药酒在民间用于治疗类风湿关节炎（RA）效果明显，课题组前期研究也证明金荞麦药酒具有明显的镇痛抗炎作用[1]，但尚未见关于抗RA作用的研究。

实验旨在研究金荞麦药酒对Ⅱ型胶原诱导关节炎模型（CIA）大鼠血清和滑膜细胞IL—22、IL—18、TNF—α的影响，探讨其抗RA免疫作用机制，为金荞麦应用于RA提供理论依据。

1仪器与材料 　　11药物雷公藤多苷片（批号：20131114，浙江得恩德制药有限公司）；金荞麦药酒，以金荞麦根茎及块根计，每毫升药酒相当于04g原药材，本院自制。

12动物Wistar大鼠60只，体重（200±20）g，SPF级，雌雄各半，合格证号：SCXK（鄂）2011—0012，由三峡大学实验动物中心提供。

13试剂完全弗氏佐剂（FCA）、鸡Ⅱ型胶原（CⅡ）由sigma 公司提供；白细胞介素—22（IL—22）、白细胞介素—18（IL—18）、肿瘤坏死因子—α（TNF—α）测定试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。

14仪器UV754紫外可见分光光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）；台式冷冻离心机（上海安亭科学仪器公司）。

2方法 　　21动物造模及分组给药随机抽取10只大鼠，为空白组，其余50只建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型[2—3]。

用02%醋酸将CⅡ溶解，使其浓度为2mg/ml，放置过夜（4℃条件下），与FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳剂，对每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3点皮内共注射04ml，在相同部位3点对空白组注射生理盐水01ml。

所有造模大鼠7d后加强免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳剂02ml。

将造模大鼠随机分为5组，即模型对照组、金荞麦高剂量组、金荞麦中剂量组、金荞麦低剂量组、雷公藤多苷组。

空白组，模型对照组于造模后给予生理盐水15ml/（kg?d），雷公藤多苷组给予雷公藤多苷片003g/（kg?d），金荞麦高、中、低剂量组分别给予金荞麦药酒540、270、135ml /（kg?d），相当于原生药216、108、054g/（kg?d），连续给药21d。

22血清TNF—α、IL—22、IL—18的测定末次给药2h后，将大鼠用3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹总动脉取血，离心，制备血清，按试剂盒说明测定血清中IL—22、IL—18、TNF—α含量。

23滑膜细胞TNF—α、IL—22、IL—18的测定取大鼠后肢右膝关节，分离出滑膜，剪碎，用生理盐水1∶20匀浆，按试剂盒说明测定血清中IL—22、IL—18、TNF—α含量。

24统计学处理数据采用SPSS 170软件进行统计处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示，采用用t检验，P 　　3结果 　　31对血清TNF—α、IL—22、IL—18的影响与空白组比较，模型对照组小鼠血清TNF—α、IL—22、IL—18含量升高，差异有统计学意义（P参考文献 　　[1] 程友斌，潘洪林. 金荞麦抗炎活性部位筛选研究[J].时珍国医国药，2009，20（9）：2219—2220. 　　[2] 徐琦，尹抗抗，谭达全，等.麻黄加术汤对大鼠类风湿性关节炎模型作用机制的研究[J].湖南中医药大学学报，2011，31（5）：13—15. 　　[3] 马艳苗，王永辉，李艳彦，等. 风湿宁胶囊对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及细胞凋亡相关基因表达的影响[J].中医杂志，2013，54（4）：326—328. 　　[4] Ahern DJ，Brennan FM. The role of Natural Killer cells in the pathogenesis of rheumatoid arthritis： major contributors or essential homeostatic modulators [J]. Immunol Lett，2011，136（2）：115—121. 　　[5] Ren J，Feng Z，Lv Z，et al. Natural killer—22 cells in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis are an innate source ofinterleukin 22 and tumor necrosis factor—α[J].J Rheumatol，2011，38（10）：2112—2118. 　　[6] 任洁，周毅，吴会霞，等. NK—22细胞及IL—22相关功能分子在类风湿关节炎滑膜细胞增殖中的作用[J].南方医科大学学报，2014，34（1）：20—24. 　　[7] 任敏，武加标，汤丽，等. 类风湿关节炎患者外周血单核细胞TLR4的表达与血清IL—18水平变化的相关性研究[J].中华临床免疫和变态反应杂志，2013， （1）：22—26. 　　[8] Pay S，Erdem H，Pekel A，et al.Synovial proinflammatory cytokines and their correlationw ithmatrix metalloprote inase—3 expression in Behcets′ disease Does interleuk in—1 beta play a major role in Behcets′ synovitis [J]. Rheumatol， 2006， 26（7）：608—613. 　　[9] 戴冽，汤美安，尹培达，等. 滑膜巨噬细胞与类风湿关节炎病情活动及关节破坏的相关性[J].中华风湿病学杂志，1999，3（4）：229—231. 　　（收稿日期：20160327）。