肝癌切除术并肝动脉结扎和门静脉化疗对复发肝癌表达MDR1和MRP的
【摘要】 目的 探讨肝癌切除并肝动脉结扎和门静脉化疗对复发肝癌多药耐药（multi drug resistance—1，MDR—1）和多药耐药相关蛋白（multidrug resistance associated protein—1，MRP—1）表达的影响。方法 应用免疫组化SABC法对23例复发的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC)手术切除的石腊包埋标本切片进行P—gp和MRP—1的蛋白表达测定，以自身原发灶作为对照进行统计学分析。结果 P—gp在HCC复发前后的阳性表达率分别为65.2%和52.2%（P0.05），MRP—1在HCC复发前后的阳性表达率分别为34.8%和69.6%（P0.05)。结论 肝癌切除并肝动脉结扎和门静脉定期化疗后复发肝癌MDR—1的表达受到抑制。
【关键词】 原发性肝肿瘤；多药耐药；P—糖蛋白；多药耐药相关蛋白；肝动脉结扎；门静脉化疗。
Abstact Objecive To explore and discuss the influence of hepatectomy combined with hepatic artery ligation and portal vein chemotherapy for hepatocellular carcinoma on the expression of MDR—1 and MRP—1. Methods The expression of P—gp and MRP—1 in 23 specimen of recurrent HCC patients was determined with immunohistochemical method. The primary tumor tissues served as a control group and analyzed statistically. Results The positive rate of P—gp expression in HCC was 65.2% before recurrence and 52.2% after recurrence(P0.05)， while that of MRP—1 expression was 34.8% and 69.5%， respectively (P0.05). Conclusion The expression of MDR—1 of the recurrent hepatocellular carcinoma is inhibited after hepatectomy combined with hepatic artery ligation and portal vein chemotherapy for hepatocellular carcinoma.
Keywords primary liver neoplasms； multidrug resistance； P—glycoprotein； multidrug resistance—associated protein；hepatic artery ligation; portal vein chemotherapy随着非P—gp介导多药耐药机制及其逆转剂的深入研究，发现其相关的基因表达和蛋白质功能处于有序的动态变化过程，但鲜有关于肝癌切除并肝动脉结扎和门静脉置泵化疗对复发肝癌多药耐药相关的基因表达产物的影响方面的报道。我们以23例原发性肝癌切除并肝动脉结扎和门静脉置泵定期化疗后2年内复发的病例作为研究对象，选取膜转运蛋白机制中具有代表性的P—糖蛋白(pglycoprotein，P—gp)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein—1，MRP—1)为检测指标，采用免疫组化SABC法测定P—gp和MRP—1在同一肝癌患者原发灶和复发灶中的表达，探讨肝癌切除并肝动脉结扎和门静脉置泵化疗对复发肝癌表达MDR—1和MRP—1的影响及临床意义。
1 资料和方法。
1.1 一般资料 筛选1996～1999年同济医院23例原发性肝癌切除并肝固有动脉结扎和门静脉置泵化疗后2年内复发再切除的二次肝癌石蜡包埋标本，且经病理证实均为肝细胞癌，以第1次切除的肝癌原发灶作自身对照。门静脉置泵化疗采用AMF方案（阿霉素+丝裂霉素+5—FU）每月1次。
1.2 试剂和方法 小鼠抗人P—gp单克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色剂均购自武汉博士德生物试剂有限公司，免疫组化按SABC试剂盒指导步骤进行染色。
1.3 结果判断 P—gp定位于细胞膜和细胞浆，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性片作阳性对照，胞浆和（或）胞膜呈棕黄色染色为阳性；MRP—1表达产物以胞浆为主，胞膜少见，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知胆管癌阳性片作对照。
１.４ 统计学方法 采用?字2检验分析，P＜0.05有统计学意义。
2 结果。
2.1 P—gp在原发灶和复发灶中的表达 P—gp染色位于肝癌细胞膜和细胞浆，呈均匀或散在棕色颗粒。23例患者中原发肝癌组织P—gp染色阳性15例，阳性率为65.2%，复发肝癌组织P—gp染色阳性12例，阳性率为52.2%，见表1。
2.2 MPP—1在原发灶和复发灶中的表达 MRP—1染色位于以胞浆为主，胞膜少有，呈均匀或散在棕色颗粒。23 例患者中原发肝癌组织MRP—1染色阳性8例，阳性率为34.8%；复发肝癌组织MRP—1染色阳性16例，阳性率为69.6%，见表2。
3 讨论。
全身化疗治疗肝癌的有效率多不超过15%，且毒副反应大，一般不单独使用。局部化疗虽其有效率稍有提高且毒副反应小，但在预防复发和延长生存期方面改善不明显。为预防肝癌复发，常用的方法有：肝动脉插管栓塞化疗（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）、门静脉化疗（port vein chemotherapy，PVC）、肝动脉化疗（hepatic artery chemotherapy，HAI）、肝动脉结扎（hepatic artery ligation，HAL）等。
徐克成[1]报道109例肝癌根治术后随访2月，发现41例有残癌（占37.6%），香港大学玛丽医院为降低复发率较早采用HAL+PVC，认为阻断肝动脉供血后使残癌生长受抑制，更有利于PVC发挥作用。HAL后虽有膈下动脉等来源的侧支血管开通[2]，但自由门静脉压力（free portal vein pressure，FPP）动态观察[3]显示门静脉血流量长时间增加，提示侧支开通的动脉供血量明显少于术前肝动脉的供血量，且供血的区域不同，故而残癌的生长环境发生改变，其MDR生物学特性亦可能发生相应变化。