岩大戟内酯B对裸鼠移植MCF—7乳腺癌抗肿瘤作用实验研究

【摘要】目的 探讨岩大戟内酯B对裸鼠移植MCF—7乳腺癌细胞生长抑制作用及其机理。

方法 雌性BALB/c裸鼠12只，接种MCF—7移植成瘤后分4组，分别为空白对照组；岩大戟内酯B组；5—Fu组；岩大戟内酯B+5—Fu组。

每3天腹腔给药1次，持续4周，剥离瘤组织，通过计算肿瘤组织体积观察药物抗肿瘤作用；采用免疫组化观察药物对PI3K/Akt mTOR信号通路的影响。

结果 各组根据肿瘤生长曲线分析，5—Fu组、岩大戟内酯B组、岩大戟内酯B+5—Fu组与空白对照组比较，有统计学差异（p毕业论文网 　　【关键词】岩大戟内酯B； MCF—7； PI3K/Akt mTOR 　　乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，近年来发病率逐年递增，生物治疗成为继放化疗、内分泌治疗后的另一种值得期待的保守治疗方法[1,2]。

本实验拟采用人乳腺癌细胞MCF—7建立裸鼠移植瘤模型，观察岩大戟内酯B对移植瘤生长的作用，并对其作用机制初步探讨，为拓展岩大戟内酯B在抗肿瘤方面的开发及应用奠定基础。

1材料与方法 　　1.1细胞系和动物：MCF—7乳腺癌细胞由北京大学肿瘤医院肿瘤分子生物学研究室惠赠。

雌性BALB/c裸鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司， 　　1.2主要仪器和药物：岩大戟内酯B由齐齐哈尔大学提取，主要试剂DMEM培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清购自美国Hyclone。

p—PK3K、p—AKT、mTOR购于cell signal technology公司。

1.3实验方法 　　1.3.1细胞培养：细胞培养均在含5%(V/V)胎牛血清的DMEM培养基中，100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素，5%CO2 37℃条件下培养，隔48h换液，含0.25%胰酶和0.02%EDTA消化液隔天消化、传代。

1.3.2建立裸鼠移植瘤模型：将处于对数生长期的细胞浓度调整为1×107 cell/ml。

无菌条件下，将人乳腺癌细胞MCF—7接种于裸小鼠腋下（细胞数为5×105 cell/只），12只BALB/c裸小鼠在造模后1周皮下明显触及肿块生长时随机分为空白对照组、岩大戟内酯B（40mg/kg）组、5Fu(5mg/kg)组、岩大戟内酯B+5Fu组，每组3只。

给药组每3天腹腔注射一次，空白对照组腹腔注射等量的生理盐水，共用药3周。

1.3.3肿瘤体积的测量：用游标卡尺测量瘤块大小，每隔3 d测量1次。

根据公式ab2/2计算瘤块的体积，a为长径，b为短径，绘制曲线。

1.3.4免疫组化：新鲜的瘤组织用4%的甲醛固定，石蜡包埋，切片，脱蜡脱水，经3%H2O2封闭内源性过氧化物酶10min，抗原修复，PBS洗1次，滴加一抗（1:100），4℃孵育过夜；滴加二抗（1:200），室温孵育30分钟；DAB显色，苏木素复染，自来水返蓝，脱水，透明，树脂封片。

1.4统计学方法：采用SPSS17.0统计软件，计量资料比较采用两独立样本t检验、计数资料比较采用χ2检验, P参考文献 　　[1] 邓莉，王卫东，陈正堂. 重组人内皮抑素联合TP方案对MCF—7裸鼠移植瘤的影响[J].现代生物学进展。

2008; 8（4）:635—638. 　　[2] 董海鹰，王知非，蔡莉.青蒿琥酯对人乳腺癌MCF—7细胞裸鼠移植瘤的作用及IGF_IR的影响[J].中国肿瘤.2008;17(12):1057—1060. 　　作者简介：许惠玉(1973—),女,2009级在读博士后,副教授，硕士研究生导师，研究方向：中药抗肿瘤 　　通讯作者：刘吉成，男, 医学博士，教授，主任药师，博士研究生导师 　　基金项目：国家自然科学基金资助(No. 30973902)。