心力衰竭大鼠脑脊液及血清瘦素改变的研究
作者：冷秀玉, 曾武涛, 熊艳， 陈国伟， 王礼春。
【摘要】 【目的】 检测心力衰竭大鼠血清、脑脊液瘦素水平及脑脊液/血清瘦素比值改变，对心衰大鼠的瘦素水平、瘦素抵抗及瘦素在血—脑脊液处的转运进行初步探讨。【方法】 通过缩窄雄性Wistar大鼠腹主动脉制成心力衰竭模型。30只大鼠随机分成空白对照组、假手术对照组和心衰组。预实验应用超声心动图和血流动力学检测证实术后4个月大鼠已经出现明显心衰。术后4个月采集脑脊液、血清，ELISA法测定瘦素水平。【结果】 心衰组的血清瘦素水平较假手术及空白对照组明显升高［(8.1 ± 4.0) ng/mL vs (3.7 ± 1.7) ng/mL, (3.1 ± 1.4) ng/mL，P 0.01］。 3组脑脊液瘦素水平无显著差异。心衰组脑脊液/血清瘦素比值较两对照组明显降低（10 ± 7 vs 18 ± 8, 22 ± 12, P 0.01）。两对照组血清瘦素水平及脑脊液/血清瘦素比值无显著差异。对照组脑脊液瘦素与血清瘦素呈正相关（r=0.724, P 0.05），心衰组两者相关性消失。【结论】 心衰大鼠血清瘦素水平升高，脑脊液瘦素水平无显著改变，脑脊液/血清瘦素比值下降，脑脊液瘦素与血清瘦素相关性减弱。支持瘦素血—脑脊液饱和转运系统的存在，提示瘦素进入中枢系统的转运障碍是瘦素抵抗的一个重要原因。
【关键词】 心力衰竭; 瘦素; 瘦素抵抗; 血—脑脊液转运。
Abstract：【Objective】 To investigate the leptin level, letpin resistance and leptin transport at blood—cerebral barrier in the rats with heart failure through assaying cerebrospinal fluid (CSF) and serum leptin level and CSF/serum leptin ratio. 【Methods】 Thirty male Wistar rats were randomly divided into blank control group (BC), pseudo—operation control group (OC) and heart failure group (HF) after heart failure was induced by constricting abdominal aorta for 16 weeks. Leptin level of serum and CSF were determined by ELISA. 【Results】 Serum level of lepin was increased in HF group compared to BC and OC groups[(8.1 ± 4.0) ng/mL vs (3.7 ± 1.7) ng/mL, (3.1 ± 1.4) ng/mL，P 0.01]. There was no significant difference of CSF leptin level among three groups. CSF/serum ratio was significantly decreased in HF group compared to BC and OC groups（10 ± 7 vs 18 ± 8, 22 ± 12, P 0.01）. No significant difference of serum leptin level and CSF/serum ratio was found between two control groups. CSF leptin level correlated positively with serum leptin level （r=0.724, P 0.05）in BC and OC groups and the relationship disappeared with increased serum leptin level in HF group. 【Conclusions】 Serum level was increased in the rats with heart failure while there was no significant change of CSF leptin level. Decreased CSF/serum leptin ratio and weakend correlation between CSF and serum leptin level indicates the existence of saturable leptin blood—CSF transport system and that deteriorating letpin transport from peripheral blood to CSF is one possible reason for letpin resistance.
Key words：heart failure; leptin; leptin resistance; blood—CSF transport。
[J SUN Yat—sen Univ(Med Sci), 2007, 28（６）:654—657]。
瘦素（leptin）是调节机体能量和体质量的重要物质，研究证实瘦素与心血管疾病有密切关系[1]。近期，在肥胖个体中发现的瘦素抵抗开始成为研究热点，尤其是瘦素在血—脑屏障的运输环节[2]。我们之前的临床研究发现慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)患者血清瘦素水平升高，可能存在瘦素抵抗[3]，但心衰患者临床研究尚未就瘦素变化得出定论[4]。原因之一是瘦素水平影响因素多，在临床研究中较难控制。动物模型则可尽量避免瘦素影响因素，但目前为止，心力衰竭动物的瘦素系统变化尚未见报道。本部分通过缩窄腹主动脉的方法建立大鼠心衰模型，通过检测心力衰竭大鼠血清、脑脊液瘦素水平及脑脊液/血清瘦素浓度比值，对心衰大鼠的瘦素水平、瘦素抵抗及瘦素在血—脑屏障处的运输进行初步探讨。
1 材料和方法。
1.1 心衰模型的建立和实验分组。
清洁级的雄性Wistar大鼠30只,体质量200～250 g,由中山大学动物实验中心提供。随机分成空白对照组（blank control, BC组, 8只）、假手术对照组（operation control, OC组，8只），和心衰组（chronic heart failure, CHF组，14只）。心衰组大鼠以10%水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉，分离出腹主动脉，在肾动脉上方将腹主动脉与钝头9号探针（外径0.8 mm）一起结扎，造成狭窄。假手术组经同样步骤，但不缩窄动脉。术后8周末开始应用超声，每4周进行一次心功能测定，至术后16周末发现大鼠出现明显心衰，取部分大鼠作血流动力学测定进一步确定[5]。
1.2 脑脊液采集。
将大鼠称重后麻醉，将头部固定于定向仪上，暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔进针直接抽取脑脊液（80～120 μL），置低温冰箱保存，待测瘦素。抽取完毕后注入等量的消毒生理盐水，以保持原来脑脊髓腔的压力[6]。
1.3 血流动力学检测。
经右颈总动脉插管（传感器）入左室，应用Biolab生物信号采集与处理系统（四川成都泰盟电子有限公司）记录左室内压变化，稳定10 min后，测定左室收缩末期压力（left ventricular end systolic pressure, LVESP）、左室舒张末期压（left ventricular end diastolic pressure, LVEDP）、左室内压力最大下降/上升速率（±dp/dt）,各数值均为连续10个心搏的平均值。
1.4 血液采集。
测定血流动力学指标后，通过动脉插管直接采血1～2 mL，置于非抗凝干燥管内，静置30 min，离心后取血清测定瘦素。
瘦素测定采用DSL—10—24100鼠瘦素ELISA Kit (Murine leptin, 天津天硕生物制品有限公司)。可测最低浓度为0.04 ng/mL，批内变异系数5.4%～6.9%，批间变异系数3.8%～7.3%。
1.6 统计学处理。
计量资料采用均数 ± 标准差（ｘ±s）表示，多组资料采用ANOVA分析，两组间差异采用多重比较方法（方差齐性采用LSD法，方差非齐性采用Tambane’s T2 法）。非正态分布资料采用秩和检验，指标间关系分析用相关性分析，以P 0.05为差异有统计学意义，所有统计数据均用SPSS 10.0数据处理软件包进行处理。