“温通针法”对拟血管性痴呆模型大鼠血浆TXB2、6
作者：刘恩远，马蕾 ;。
摘; 要:目的：探讨温通针法治疗血管性痴呆(VD)的机理，为进一步推广本疗法奠定基础。方法：将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、捻转针法组、温通针法组、药物组，采用反复夹闭双侧颈总动脉―再灌注造成血管性痴呆大鼠模型，并行相应处理。各组大鼠经过治疗，跳台实验结束后，利用放射免疫学方法检测大鼠血浆中血栓素B2(TXB2)及6—酮—前列腺素F1(6KetoPGF1)含量。结果：温通针法能使VD大鼠血浆中6KetoPGF1含量显著升高，TXB2含量显著下降。结论：温通针法通过调整VD大鼠血浆中TXB2、6KetoPGF1之间的平衡，增加VD大鼠脑血流量，改善脑功能。这可能是温通针法治疗VD取效的主要机制之一。
关键词:温通针法；血管性痴呆；血栓素B2；6—酮—前列腺素F1。
血管性痴呆(VD)是一系列脑血管因素导致脑血管损害所引起的痴呆的总称,是在智能获得充分发展后,由于中风的损害造成退化的结果[1]。随着社会的日益老龄化，脑血管疾病成为人类的多发病、常见病，而血管性痴呆作为脑血管疾病的并发证之一，也日益危害着人类的健康。本实验从分子生物学的角度，运用放射免疫学方法研究温通针法对血管性痴呆模型大鼠血浆中血栓素B2(TXB2)、6—酮—前列腺素F1(6KetoPGF1)含量的影响，从而揭示温通针法对血管性痴呆的治疗作用机理。
1实验材料。
1.1实验动物。
雄性Wistar大鼠60只,体重25030 g（兰州军区总医院动物研究中心提供）。
1.2实验药物。
尼莫地平片（由西安博爱制药有限责任公司生产，批号:E035)；2 %戊巴比妥钠、硝普纳（双鹤药业生产，批号：京卫药准字[1996]第107043号）。
1.3仪器及试剂; SN—682放射免疫计数仪（中科院上海核子所日环仪器厂）；80—1型电动离心机（上海手术机械厂）；AB204—WO型电子天平(瑞士,梅特勒—托力多有限公司)；跳台实验装置（自制）； TXB2试剂盒、6ketoPGF1试剂盒，批号: 20050527（均由中国人民解放军总医院放免研究所生产）。
2实验方法。
2.1模型的建立采用改进的拟血管性痴呆大鼠的造模方法[2]。将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、捻转针法组、温通针法组、药物组。术前12 ｈ禁食水。除假手术组外，其余各组大鼠均用2 %戊巴比妥钠(2.5 mL/kg)腹腔麻醉，备皮消毒后，行颈正中切口，钝性分离双侧颈总动脉及神经,腹腔注射硝普钠(2.5 mg/kg)，随即用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉10 min，再灌注10 min，再夹闭10 min后恢复灌注，缝合伤口。放回笼中保温饲养,每只肌注青霉素20万Ｕ,连续5 ｄ,以防感染。假手术组仅分离双侧颈总动脉后缝合。造模后动物在同等条件下［室温(205)℃，相对湿度(455)%］，普通饲养，自由饮水。
2.2治疗。
①取穴：人中、照海、太溪。 ② 温通针法操作：针穴部位及针具常规消毒后，押手紧按穴位，刺手持针刺入穴内，候其气至（针下有沉紧感），押手加重压力，刺手用力向前连续捻按9次，使针下继续沉紧，针尖拉着有感应部位连续小幅度重插轻提9次后，再向前连续捻按9次，针尖顶着有感应的部位推弩守气，使针下持续沉紧，同时双手施以关闭法，以促使针下热感向前传导，到达病所，然后缓慢将针拔出，紧按针孔，每穴每次操作1 min，连续治疗14 d。 ③ 捻转针法[3]：针穴部位及针具常规消毒后，将针刺入穴位，施以前后捻转的手法，指力均匀，角度适当（180），不单向捻动，每穴每次操作1 min，连续治疗14 d。 ④ 选用30号0.5寸毫针。 ⑤ 穴位定位：按照《实验针灸学》中实验动物常用腧穴简表定位。 ⑥ 药物组：尼莫地平片与蒸馏水调制成混悬液灌胃，剂量为10.8 mg/(kg・d)，浓度为1 mg/mL,共治疗14 d。假手术组、模型组每日灌胃10.8 mg/(kg・d)剂量的蒸馏水。
各组大鼠治疗期满后，进行跳台实验。跳台装置为15 cm30 cm30 cm的被动条件反射箱，四周为黑色塑料板，底面为通电的铜栅。箱正中央放置一高和直径为4.5 cm的橡皮垫作为动物回避电击的安全区。先将动物放在反应箱内的橡皮台上适应3 min，然后立即通以40 Ｖ交流电，动物受到电击后逃避反应为跳上橡皮台。分别记录各组大鼠在通电后从箱底到达安全区所需时间（潜伏期）和5 min内大鼠受到电击的次数(错误次数)作为判断大鼠学习记忆成绩的指标。
2.4 血浆标本制备。
各组大鼠断颈后，取中段血3 mL，加入消炎痛EDTANa2液0.2 mL，并颠倒混匀，3500 r/min 4℃下离心15 min，分离血浆，置于—20 ℃保存待测。
2.5TXB2、6ketoPGF1的检测。
用放射免疫法测定血浆中TXB2、6KetoPGF1，操作程序均严格按照试剂盒说明书进行。
2.6统计学处理。
数据以ｓ表示，组间比较采用ｔ检验。
3实验结果。
结果见表1。表1所示：模型组与假手术组比较，跳台实验潜伏期明显延长(Ｐ0.01)，错误次数明显增多(Ｐ0.01)，说明模型大鼠具有明显的学习记忆再现障碍，表明造模成功。各治疗组错误次数均较模型组有明显减少、潜伏期有所缩短(Ｐ0.05或P0.01)。温通组、药物组的潜伏期、错误次数、TXB2与捻转组比较均有差异(Ｐ0.05)，温通组与药物组各项比较无差异，说明温通组在提高脑痴呆模型大鼠学习记忆能力、降低血浆TXB2含量和恢复TXB2、6KetoPGF1平衡方面效果优于捻转组。表1各组跳台实验潜伏期、错误次数及TXB2、6KetoPGF1检测结果的比较; (略)。