苜蓿总皂苷提取物抗动脉粥样硬化和降血脂的实验研究

作者：邴飞虹，程静，冯新刚，万敏，韩俊，李婧，廖一帆。

【摘要】 目的观察苜蓿总皂苷提取物抗大鼠动脉粥样硬化和降血脂作用。方法该实验采用高脂饲料、血管壁钙超载、内皮损伤三者结合引发大鼠大血管动脉粥样硬化斑块模型。检测指标：用紫外分光光度计测定血清总胆固醇TCH，甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDLC)的含量;并计算低密度脂蛋白(LDLC)的含量和动脉粥样硬化指数(AI);检测主动脉的病理变化。结果苜蓿总皂苷提取物可明显降低高脂血症大鼠的血清TCH，TG，LDLC水平，明显升高HDLC水平，明显降低AI，与模型组比较有显著性差异(P 0.05);主动脉斑块的病变分级，苜蓿总皂苷提取物明显降低粥样硬化面积，与模型组比较有显著性差异(P 0.05)。冠状动脉病变分级，苜蓿总皂苷提取物能明显降低AS病变发生率，减轻斑块对管腔的阻塞程度。结论苜蓿总皂苷提取物具有降血脂和抗动脉粥样硬化的作用。

【关键词】 苜蓿总皂苷提取物; 大鼠; 动脉粥样硬化; 降血脂。

Abstract：ObjectiveTo observe the antiatherosclerotic and hypolipidemic effects in rats of alfalfa extract of total saponins. MethodsThe atherosclerosis model in rats was set up by high fat diet in combination with blood vessel wall calcium overload and endothelial injury.Bloodfat levels(TC，TG，LDLC , HDLC and AI)in serum were measured by ultraviolet spectrophotometer.The rats were sacrificed and the aorta, heart, liver and renal were collected for pathological changes. ResultsAlfalfa extract of total saponins could significantly decrease the contents of serum TC，TG , AI and LDLC，and reduce the score of pathological changes of aorta, heart, liver and renal，while the level of HDLC was increased as compared with those of model group(P0.05 or P0.01). Coronary artery lesion classification, total saponins of alfalfa extract could significantly reduce the incidence of AS lesions, alleviate the degree of luminal obstruction, compared with the model group,there was significant difference.ConclusionThe results indicate that alfalfa extract of total saponins can inhibit experimental hyperlipidemia,and prevent the formation of atherosclerosis.

Key words： Total saponins of alfalfa extract; Atherosclerosis; Antiatherosclerotic。

苜蓿为豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。性味：苦，平，主要功能为“清脾胃、利大小肠，下膀胱结石”。《本草纲目》记载苜蓿“安中利入，可久食。利五脏、轻身健人。”民间常有“用饲牛草，嫩时人兼食之”之说。在我国中部、西部、华北广大地区，人们常摘苜蓿嫩草入菜。自古以来，苜蓿既可以作为食物入菜充饥，又可以作为药物以疗疾患。苜蓿总皂苷提取物不仅对于高脂血症有治疗作用，且由于毒性低微，还可以作为中老年人长期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代谢紊乱和抗AS方面有其独到之处[1]。一般降胆固醇制剂的作用部位在肝脏，是当胆固醇通过胃肠道吸收进入血液达到肝脏后才起作用。而苜蓿提取物降胆固醇的机理是在胃部阻止外源性胆固醇在胃肠道吸收，同时促进内源性胆固醇和胆汁的排泄，使血清磷脂浓度降低，血浆蛋白在体内分布正常，并能有效地控制血浆胆固醇和甘油三酯，从而避免了对肝脏损害的不良反应，使苜蓿提取物的开发具有更大的前景。国外对其展开研究，但是国内研究较少。本实验就苜蓿提取物作为药物在抗大鼠动脉粥样硬化和降血脂方面的作用进行研究。

1 材料与仪器。

1.1 受试药物苜蓿总皂苷提取物，由中山市中健药物研究所有限公司提供，批号：060828，061010。加蒸馏水配成所需浓度，4℃保存备用。

1.2 药品和试剂绞股蓝总苷片，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，批号：E6A003，规格：每片含绞股蓝总苷20 mg，药片粉碎后加蒸馏水配成所需浓度，4℃保存备用;丙硫氧嘧啶片，由上海复星朝晖药业有限公司提供。批号：070901，规格：每片含丙硫氧嘧啶50 mg;维生素D3注射液，由上海通用药业股份有限公司提供，批号：080401，规格：7.5 mg/ml。总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)测定试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)测定试剂盒，批号分别为011M042、010M050、012L028、012L028，均由上海名典生物工程有限公司提供;胆固醇，由上海科瑞生物有限公司提供;戊巴比妥钠，由北京化学试剂公司提供，批号：20071019;食用猪油，由宜昌双汇食品有限责任公司提供。

1.3 仪器Spctrumlab 53 power紫外分光光度计，上海棱光技术有限公司产品;TB718E组织自动包埋机，湖北泰维医疗科技有限公司提供;TC120S组织自动脱水机，湖北泰维医疗科技有限公司提供;RM2135石蜡切片机，德国Leica公司产品;HM525冰冻切片机，德国Microm公司产品;802B型台式离心机，上海安亭科学仪器厂;电子精密天平，奥豪斯公司;恒温水浴锅，北京市医疗设备厂提供;WH1微型旋涡混合仪，上海泸西分析仪器厂。

1.4 动物Wistar大鼠，SPF级，体质量(200±10)g，雄性，由湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK(鄂)20030005。

2 方法[1，2]。

2.1 造模取雄性大鼠50只，每只大鼠右下肢肌肉注射维生素D3 3×105U/kg，并给予高脂饲料(2%胆固醇，0.5%胆酸钠，3%猪油，0.2%丙基硫氧嘧啶，94.3%基础粉末饲料，维生素D3粉剂1.25×106 U/kg)，7 d后行球囊损伤手术。另取10只作为空白对照，给予普通饲料。

球囊损伤手术：动物用戊巴比妥钠(35 mg/kg体重)腹腔麻醉，仰卧固定，皮肤消毒，正中切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉，结扎远心端，插入球囊，进入约8 cm，球囊内注入0.2 ml生理盐水，向回拉动3～4 cm，放水再进入约8 cm，注水、回拉，共3次。拔出球囊，层缝合皮下组织、皮肤。消毒切口皮肤，切口处洒适量注射用青霉素粉剂。术后连续7 d给予肌肉注射青霉素，切口处用碘酒消毒。

2.2 分组及给药术后按体质量随机分为5组。苜蓿总皂苷高剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.7 g/kg;苜蓿总皂苷中剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.35 g/kg;苜蓿总皂苷低剂量组：苜蓿总皂苷提取物0.18 g/kg;阳性组：绞股蓝总苷片56 mg/kg;模型组：等体积蒸馏水，灌胃同时给予高脂饲料;空白组：等体积蒸馏水，灌胃同时给予普通饲料。按体质量1.0 ml/100 g灌胃，1次/d，连续给药90 d。

2.3 取样及检测指标末次给药后，禁食不禁水12 h，断头取血，3 000 r/min离心15 min，分离血清。用紫外分光光度计测定血清总胆固醇(TCH) (PAP法)，甘油三酯(TG)(PAP法)和高密度脂蛋白(HDLC)(PTGMg2+ PAP法)的含量;并计算低密度脂蛋白(LDLC)的含量和动脉粥样硬化指数(AI)。

分离主动脉，纵行切开，0.9%生理盐水冲洗干净，苏丹Ⅲ染色，照相，以百分率法算出斑块面积占动脉壁总面积的百分率，按分级法统计主动脉病变级别。计量资料以组间t检验进行统计比较，等级资料以秩和检验进行统计比较，百分率以卡方检验。主动脉斑块分级标准：0级内膜表面光华，无奶油色变化，即无斑块;0.5级内膜有广泛的奶油色或乳白色变化，但无凸出于表面的斑块;1级有明显的奶油色凸起斑块，面积小于3mm2;2级斑块面积大于3mm2;3级有许多大小不等的斑块，有的融合成片，大块的斑块面积超过3mm2;4级动脉内膜表面几乎为全为融合的斑块所覆盖。

主动脉用10%福尔马林溶液固定36 h后，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，在切片机上横断面制成5 μm厚连续切片。HE染色片随机选取10个视野测定主动脉内膜厚度，内膜/中膜厚度比值。

分离心脏，用10%的福尔马林固定，再将心脏横切成3块，每块冰冻切片至少两片，用苏丹Ⅲ及苏木素染色，每个切片一般都观察10个动脉断面并按下列标准分级：0级动脉内膜无脂质浸润;0.5级动脉内膜有轻度脂质浸润;1级内膜斑块占血管腔面积的1/4;2级内膜斑块占血管腔面积的1/2;3级内膜斑块占血管腔面积的1/2以上;4级斑块几乎堵塞整个管腔。