谷氨酰胺对短肠综合征大鼠模型结肠黏膜作用的初步研究
作者：孙欣，林方才，李光，邓海，阴凯，刘京平。
【摘要】 目的 探讨谷氨酰胺联合肠内营养对动物模型结肠黏膜的影响。方法 将大鼠随机分为5组，即模型肠内营养组、谷氨酰胺大剂量+肠内营养组，谷氨酰胺中剂量+肠内营养组，谷氨酰胺小剂量+肠内营养组。分为7天，14天2个时间点进行观察。结果 Gln各组肠壁肌层增厚明显，皱襞明显增高，肠腺数量增多，其中大、中剂量组的皱襞不仅高且密集，皱襞高度、肠腺密度均明显大于模型组（P＜0.01）。结论 谷氨酰胺+肠内营养比单用营养的模型组更可以促进大鼠结肠的代偿，大、中剂量组优于小剂量组。
Initial study of glutamine to colon mucosa of rat of SBS model。
【Abstract】 Objective To detect the influence of glutamine combined with enteral nutrition to rat model colon mucosa.Methods Rats were divided into 5 groups,that is model EN group,large,middle,small dose of glutamine+EN group,which were observed at the 7th,14th day.Results Plica of Every group of glutamine andcrypts of Lieberkuhn increased obviously,large,middle dose of Glutami+EN group have significant difference with model grou.Conclusion Glutamine group may enhance compensation of colon mucosa of rat.
【Key words】 glutamine;short bowel syndrome;colon mucosa。
短肠综合征(short bowel syndrome,SBS)是指小肠因病变(肠系膜血管血栓形成或栓塞、肠扭转、外伤性肠系膜血管破裂、急性坏死性小肠炎等)切除70%以上,引起水、电解质及营养物质吸收障碍的综合征,临床表现为腹泻、脂肪泻、营养不良和体重下降,若处理不当可使病情恶化直至死亡。本研究采用了谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对因手术切除大部分小肠所致的短肠综合征的大鼠动物模型进行肠内营养,观察结肠黏膜组织形态学的代偿改变程度,旨在为临床治疗提供生物学依据。
1 材料与方法。
1.1 材料。
1.1.1 实验动物和实验环境 SD清洁级6个月龄大鼠,雌雄各半,雄性体重(325±25)g,雌性体重(320g±15)g,6个月龄,购自北京维通利华实验动物中心,合格证号为:京动许字(2000)第004号(总049号)。大鼠喂养和实验均在北京中医药大学临床药理研究中心清洁级动物实验室内进行,合格证号为：SYXK 11—00—0029,京动许字(1999)第039号,医动字第01—2094号(1999)。大鼠垫料为消毒垫料。笼具用过氧乙酸溶液消毒。大鼠可自由饮水，光照与黑暗为12h交替,室温为22℃～25℃。
1.1.2 药物 百普素(PEPTI—2000 variant)粉剂，由短肽链乳清蛋白、中链甘油三酯和麦芽糖糊精等组成,为荷兰Nutricia公司生产,进口号X20000386。3.5%水合氯醛(药理研究中心清洁级动物实验室自行配制)。青霉素钠粉剂批号:9807128(华北制药股份有限公司)。谷氨酰胺,购自北京化学试剂公司。
1.1.3 仪器 精密电子天平(上海医疗设备厂)，石蜡切片机(德国Leica),石蜡包埋机(德国Lei—ca),代谢笼,手术器械,鼠板。营养输液泵(Nutricia公司,荷兰)，BX—60光学显微镜(日本Olympus),SPOTⅡ software V3.0图像拍摄系统(美国Diagnos—tic Instruments)Metamorph Imaging System V4.5图像分析软件(美国)。
1.2 实验方法。
1.2.1 动物分组 将大鼠随机分为5组,即模型肠内营养组、谷氨酰胺大剂量+肠内营养组,谷氨酰胺中剂量+肠内营养组,谷氨酰胺小剂量+肠内营养组。分为7天,14天2个时间点,每个时间点每组各7只,雌雄各半。
1.2.2 造模方法 大鼠术前禁食水。3.5%水合氯醛(1ml/100mg)腹腔麻醉,麻醉成功后,将大鼠仰卧位消毒,铺无菌巾,作腹部正中切口,长约3cm,保留距Treitz韧带3cm近段空肠和距回盲瓣10cm的回肠,分段处理肠系膜,切除中间的小肠,然后以6—0无损伤缝针行空回肠两断端一层吻合,并于吻合口下端1cm处造瘘置1枚直径5mm的硅胶管,由腹部另戳创引出沿皮下隧道至背部两肩胛骨中间引出,以防大鼠咬断,关闭腹部切口。术前30min腹腔注射及术后3天肌注青霉素。
1.2.3 药物及营养素给予方式 术后6h分别经小肠造瘘管4次/d滴注营养素—百普素,浓度为25.2(80kcal),共80ml。谷氨酰胺按0.13g/(kg・d)溶于生理盐水中于每日晨空腹时泵入,每日1次。谷氨酰胺按大、中、小剂量8.45、16.9、33.8g/(kg・d)给予。给药体积均为1ml/100g,各组大鼠每天喂养时间相同。
1.3 标本收集和检测 分别在术后7天,14天麻醉、剖腹,将吻合口远端至肛门全部大小肠取出,自然展平,在无张力状态下量取结肠长度,去除结肠内容物后并称重,最后处死动物。留取结肠标本,取近回盲部1cm结肠约2cm做形态学检测。标本HE染色后,在光镜低倍镜下用图像分析软件随机双盲测量皱襞高度和肠腺分布的密度(单位面积内肠腺断面的数量)。
1.4 统计学方法 数字统计采用SPSS 11.5软件包进行统计学分析。多组间比较采用F检验,两两比较比较采用q检验,所有数据均以均数±标准差（x±s）表示,以P＜0.05为差异有显著性。