水提—壳聚糖澄清—大孔树脂纯化法制备葛根总黄酮工艺研究
作者：张彤，郑彩美，陶建生，丁越，沈婷婷。
【摘要】 目的优化葛根总黄酮提取工艺。方法采用水提壳聚糖澄清法与传统水提醇沉法平行对比，正交实验考察解吸剂（乙醇）浓度、解吸温度、洗脱速度3个因素，以总黄酮提取量、葛根素提取量、得膏率为考察指标综合评价。结果壳聚糖澄清工艺能有效保留葛根中葛根素及总黄酮等有效成分，节省乙醇用量，缩短生产周期。选取最佳纯化条件：乙醇浓度为70%，洗脱温度35℃，洗脱速度为2BV/h。采用该工艺葛根总黄酮纯度达60%以上。结论该法简单可取，适合于工业化大生产。
Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction technology of the total flavones in Radix Puerariae. MethodsContrast the methods of clarifying water extractive solution of Radix Puerariae by chitosan and by alcohol. The orthogonal design method was adopted to study the effect of three factors including the concentration of the alcohol, the temperature and the speed of desorption. Extraction rate of total flavones and puerarin, the yielding rate of extractive were regarded as indexes.ResultsThe clarifying process of chitosan could remain the effective contents such as the total flavones and puerarin. It not only saved the volume of alcohol, but also cut down the period of production. The optimum separation conditions were the elute solution of 70% alcohol, the speed of 2 drops per second and the temperature of 35℃. The yield of total flavones from Radix Puerariae by the purity reached above 60%. ConclusionThe process is simple and preferable, which adapts to industrial production.
Key words：Total flavones in Radix Puerariae; Puerarin; Extraction; Macroporousresin 葛根为常用中药，始载于《神农本草经》，性味甘、辛、凉,归脾、胃经。具有解肌退热、生津、透疹和升阳止泻等功效。用于外感发热头痛、项背强痛、心绞痛、高血压病、口渴、麻疹不透、热痢等。已知葛根中所含的主要成分为异黄酮：葛根素、大豆苷、大豆苷元等。本工艺采用的水提—壳聚糖澄清—大孔树脂纯化制备葛根总黄酮，以期为工业化大生产提供参考。
1 仪器与试药 美国惠普UV—8453紫外—可见分光光度计；Agilent 1100液相色谱仪；Sartorius Cp225D型电子天平；上海申生RE—52AA型旋转蒸发器；DZF—6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；LXJ—IIB低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂）；HHS型电热恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。AB—8大孔树脂（天津南开大学树脂厂生产）；葛根饮片（批号：061216，上海康桥中药饮片有限公司）；葛根素对照品（批号：110752—200209，中国药品生物制品检定所）；壳聚糖、乙醇、甲醇为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
2 方法与结果。
2.1 大孔吸附树脂预处理取大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗脱，至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
2.2 含量测定用紫外—可见分光光度法测定葛根总黄酮的含量［1］。用高效液相色谱法测定总黄酮中葛根素的含量［2］。
2.3 葛根总黄酮的提取取葛根饮片20 g，置800 ml烧杯中，加200 ml水，浸泡30 min ，煮沸1 h ，纱布滤过，药渣用160 ml水再煮沸30 min ，纱布滤过，合并两次的滤液，浓缩至6 ml/g生药。
2.4.1 初步纯化工艺选择水提壳聚糖澄清工艺：水煎液浓缩至浓度为6 ml/g生药时，取50 ml的浓缩液 3 份，每份加10%～15%体积的1%壳聚糖溶液沉淀，静置一夜，1 500 r/min 离心30 min ，弃去沉淀，上清液进行含量及得膏率测定。 水提醇沉工艺：水煎液浓缩至浓度为1 ml/g生药时，以95%乙醇醇沉至含醇量70%。1500 r/min离心30 min，弃去沉淀，上清液进行含量测定及得膏率测定。 浸膏得率测定：分别取上述两种提取方法的供试品适量，转移到100 ml蒸发皿中，水浴蒸发，近干后置烘箱内105℃干燥2 h，取出置干燥器内冷却30 min，称重。再以105℃干燥2 h，冷却，至恒重。结果见表1。表1 澄清工艺与醇沉工艺比较（略）。
结果表明，与醇沉工艺相比，壳聚糖澄清工艺能有效保留葛根中葛根素及总黄酮等有效成分，能节省乙醇用量，缩短生产周期。壳聚糖澄清剂能以电中和及吸附架桥的方式去除水提液中各种悬浮颗粒及蛋白质、鞣质、果胶等大分子物质，达到分离纯化的目的。但单独应用得膏率仍偏高，一般可作为初步精制方法。与其它方法联用，分离纯化效果较好。