超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别
【摘要】 目的为充分利用小叶榕植物资源，避免资源的浪费，探讨小叶榕总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从小叶榕中提取总黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得供试品溶液中总黄酮的含量C=0.391 6 mg/ml，回收率为100.16%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是一条提取小叶榕总黄酮类物质的有效途径。
Abstract：ObjectiveTo develop a method for the extraction and identification of total flavanone of Xiaoyerong.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Xiaoyerong with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Xiaoyerong .ResultsThe content of the total flavanone of Xiaoyerong was C=0.3917mg/ml and the rate of recovery was 100.16%.Conclusion This method is a purely physical process and has not any pollution .It is an ideal way to extract the flavanone of Xiaoyerong.
Key words：Ultrasonic wave treatment； Xiaoyerong； Total flavanone； Identification。
小叶榕为桑科植物榕树Ficus microcarpa L.f.的干燥叶，又名细叶椿、细叶榕、垂叶榕，属桑科椿属常绿大乔木，高20～25m，生气根［1～2］。全年可采收，斩取叶和幼枝，除去树枝，取净叶片，晒干。小叶榕多生长于村边或山林中，分布于广西、广东、福建、台湾、浙江南部、云南、贵州。印度、缅甸、马来西亚也有。 小叶榕既可作风景树、行道树，树皮纤维可制鱼网和人造棉，又具有药用价值。小叶榕的茎、皮、果、叶、胶汁等均可入药，具有祛风清热、活血解毒、散淤理湿等功效。民间多用于治疗关节风湿痛、跌打损伤、小便不通、风火牙痛、急性痢疾及肠炎、疥癣、痔疮等病症。其叶、皮、果等提取的浸膏是治疗咳嗽、感冒类中成药的主要原料。
近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［3～4］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［4］，但超声技术应用于提取小叶榕中黄酮类物质的研究尚未见报道。本文报道用超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别。
1 仪器与试剂。
1.1 仪器。
HS10260D型超声波清洗器(超声工作频率40 kHz，天津市恒奥科技发展有限公司)；UV—2450型紫外—可见分光光度计(日本岛津)；ZF7C型三用紫外分析仪(上海康华生化仪器制造有限公司)；2×Z—1旋片式真空泵（浙江黄岩求精真空泵厂）；AUY220型电子天平(日本岛津)。
1.2 试剂。
甲醇AR；乙醇AR；镁粉AR；盐酸AR；芦丁(Rutin)对照品（中国药品生物制品检定所）；新鲜小叶榕采自贵州省兴义市沧江乡。
2 方法与结果。
取新鲜小叶榕，烘干(55℃)，粉碎(过三号筛)。取55℃干燥至恒重的小叶榕粉末(过三号筛)约0.2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇90 ml，，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)45 min，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，得供试品溶液。
2.2 测定方法依据。
以芦丁为对照品测定小叶榕中总黄酮的含量，用盐酸—镁粉显色法，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升中含芦丁0.230 8 mg的溶液，即得。
2.3.2 波长的选择精密量取芦丁对照品溶液（0.230 8 mg/ml）和供试品溶液各1.0 ml，分别置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴（15℃左右）中缓缓滴加浓盐酸3.0 ml，摇匀，加70％乙醇至6 ml，摇匀，置沸水浴中保温35 min，取出，迅速冷却至室温，用70％乙醇补充至原体积，以相应试剂为空白，在400～700 nm波长范围内扫描测定吸收光谱。 采用盐酸—镁粉显色法对总黄酮进行显色并进行全波长扫描。结果发观，用盐酸—镁粉显色后，芦丁对照品、供试品的最大吸收波长基本一致，均为（510±5）nm，重复性好，同时空白溶液显色前后及芦丁对照品、样品显色前在该波长处均无明显吸收，故选择盐酸—镁粉显色法，在510 nm波长处测定小叶榕总黄酮含量。
2.3.3 标准曲线的制备。
精密量取对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴（15℃左右）中缓缓滴加浓盐酸3.0 ml，摇匀，加70％乙醇至6 ml，摇匀，置沸水浴中保温35 min，取出，迅速冷却至室温，用70％乙醇补充至原体积，以相应试剂为空白，在510 nm波长处测定吸光度（见表1）。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.048 1+1.169 6C，r=0.999 5（n=3）。表1 紫外—可见分光光度计测定吸光度结果（略）。
2.3.4 提取物含量的测定精密量取样品溶液1.0ml，置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.506，根据回归方程：A=0.048 1+1.169 6C，计算出供试品溶液中总黄酮的含量C=0.391 6 mg/ml，小叶榕供试品中含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计为19.58%。
2.3.5 回收率实验［5］。
精密量取供试品溶液1.0 ml，加入芦丁对照品溶液1.0 ml（0.230 8 mg/ml），同前供试品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.16%。