人脑胶质瘤中cyclin B1的表达及其与细胞增殖活性的关系
作者：杜程钢，傅向平，李安民，张志文，赵明，郭晓明。
【摘要】 目的 研究人脑胶质细胞瘤中细胞周期素B1（cyclin B1）的表达水平，及其胶质瘤细胞增殖活性的关系。方法 采用SABC免疫组化方法检测62例人脑胶质瘤和14例正常脑组织标本中cyclin B1和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平，观察并对比各病理等级中表达水平。结果 cyclin B1在正常脑组织中表达率为7.1%（1/14），其阳性率和平均标记指数随着胶质瘤病理分级的增高而明显升高(P0.05)。双元相关性分析发现cyclin B1与PCNA的表达呈显著正相关（Pearson相关系数r=0.576，P0.01）。结论 人脑胶质瘤中cyclin B1的表达与病理学分级和肿瘤细胞增殖活性关系密切，可能是肿瘤恶性增殖的促进因素。
【关键词】 胶质瘤；cyclin B1；PCNA；免疫组织化学。
Abstract： Objective To study the expression of cyclin B1 in human gliomas and its relationship with cellular proliferation activity.Methods The expression of cyclin B1 and PCNA were detected by immunohistochemistry in 62 human brain gliomas and 14 normal brain tissues in each WHO grade of human brain gliomas.Results Positive rate of cyclin B1 in normal brain tissues was 7.1%(1/14). In human brain gliomas, positive rates and mean labeling indices for cyclin B1 increased with the advancing of pathological grades(P0.05). Positive correlation was obtained between cyclin B1 and PCNA by bivariate correlation analysis (Pearson correlation coefficient r=0.576，P0.01). Conclusion Expression of cyclin B1 is correlated with the cellular proliferation activity as well as pathological grades in human brain glioma. It may be an important factor in promoting the cell transformation to malignant phenotype.
Key words： glioma; Cyclin B1; PCNA; immunohistochemistry。
G2/M调控点是细胞内外信号调控细胞增殖的关键点，与肿瘤的发生发展关系密切。细胞周期素B1（cyclin B1）是G2/M调控点重要调控蛋白，对于细胞增殖起着重要的正性调控作用。有实验发现cyclin B1在多种肿瘤中过度表达[1]，认为与肿瘤的发生相关。本研究检测了62例脑胶质瘤标本中cyclin B1的表达，观察其与增殖细胞核抗原（PCNA）标记指数的关系，探讨cyclin B1与细胞恶性增殖的关系。
1 材料和方法。
1.1 一般情况 脑胶质瘤标本62例取自本院病理科保存的2001—2004年胶质瘤石蜡包埋标本，5 μm 厚切片。病理诊断：星形细胞瘤32例，少枝胶质细胞瘤12例，胶质母细胞瘤18例。按WHO神经系统肿瘤分级：Ⅰ级9例，Ⅱ级15例，Ⅲ级20例，Ⅳ级18例。其中男36例，女26例，年龄19～72岁，平均38岁。14例正常脑组织取自急性脑外伤患者的内减压术。兔抗人cyclin B1和小鼠抗人PCNA单克隆抗体均购自Santa Cruz公司，SABC免疫组化试剂盒为武汉博士德公司产品。
1.2 方法 免疫组化染色采用SABC法。石蜡切片常规脱蜡至水，30％H2O2室温下阻断30min，微波修复抗原，正常山羊血清室温下封闭30 min，分别滴加兔抗人cyclin B1(1：100)、小鼠抗人PCNA（1:100），4 ℃ 过夜，滴加生物素化山羊抗小鼠/兔IgG，室温下孵育30 min，滴加SABC，孵育30 min， 避光DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，于镜下观察。0.01 mol/L PBS代替一抗为阴性对照，正常脑组织为正常对照组。结果以胞核中出现棕黄色染色为阳性，每一级别胶质瘤中阳性染色例数的比例为该级别的阳性率。随机计数每一标本中5个以上高倍视野的1 000个细胞，平均每100个细胞中阳性染色为标记指数（血管壁出现阳性细胞不予计数）。
1.3 统计学方法 数据用（x±s）表示，采用奇思软件的χ2检验、t检验和双元相关性检验，进行统计学分析，P0.05为有统计学意义。
2 结果 2.1 cyclin B1和PCNA在脑胶质瘤中的表达 cyclin B1在人脑胶质瘤细胞的胞核中出现阳性染色，染色深浅不一。在胶质瘤标本中cyclin B1的总阳性率为42.3%(22/52)。随胶质瘤病理分级的增高，cyclin B1的阳性率和标记指数呈增高趋势（Tab1）。其阳性率在恶性程度高低度间无统计学差异(P0.05)，其标记指数间存在统计学差异（P0.05）。阳性率和标记指数在Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级各组之间有统计学差异(P0．05)。正常脑组织中cyclin B1阳性染色率仅为7.1%（1/14），与肿瘤各组间有统计学差异（P0.05）。
与正常脑组织比较，①P0.05;与Ⅰ级比较,②P0.05;与Ⅱ级比较,③P0.05;与低级别胶质瘤比较,④P0.05。
2.2 cyclin B1与PCNA 标记指数相关性 随PCNA表达的增高，cyclin B1的表达呈现逐渐增高的趋势。经Pearson相关分析，二者标记指数呈显著正相关（Pearson相关系数r=0.576，P0.01），提示cyclin B1与胶质瘤细胞的增殖活性之间存在密切联系。