刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及MDA含量、SOD和乙酰胆碱酯酶活性
【摘要】 目的 观察刺五加提取液对老年性痴呆(AD)模型小鼠学习记忆障碍及脑组织生化学改变的保护作用。方法 50只健康昆明种小鼠雌雄各半，随机分为5组，对照组、AD模型组、刺五加低剂量组、刺五加高剂量组、脑复康组。50 d隔日腹腔注射三氯化铝100 mg/kg小鼠，建立拟AD模型，采用跳台实验和水迷宫测试方法和生化学检测方法，观察刺五加提取液对AD模型小鼠学习记忆障碍的影响以及脑组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、乙酰胆碱酯酶（TChE）活性改变的影响。结果 模型组跳台实验潜伏期缩短、错误反应率增加（P＜0.05）；水迷宫实验中小鼠全程游泳时间延长、无误率减少，脑组织MDA含量增高、SOD活性降低、TChE活性增加（P＜0.05）。同时给予低、高剂量刺五加提取液不同程度地缓解学习记忆能力障碍及脑组织生化学改变（P＜0.05，P＜0.01）。结论 刺五加提取液通过提高小鼠脑组织中SOD活性和抑制脑中TChE活性，明显改善AD模型小鼠的学习记忆障碍及脑组织生化学改变，对AD有一定的改善和保护作用。
【关键词】 刺五加；老年痴呆；MDA；SOD；TChE。
老年性痴呆（AD）病因及发病机制迄今尚不清楚，更没有研究出根治AD病的药物，目前在临床上已经使用的治疗药物副作用大，疗效均不能令人满意〔1〕。中药刺五加（Acanthopanax senticosus）为五加科植物，味辛、微苦、性温、无毒，具有多种药理作用和临床应用，能益气健脾、补肾安神，用于脾肾阳虚,体虚乏力,食欲不振,腰膝酸痛,失眠多梦〔2〕。本文采用慢性铝中毒模型，选用行为学测试方法和脑组织生化学检测方法，初步探讨了刺五加提取液对AD的保护作用。
1 材料与方法。
1.1 材料与试剂。
本院实验动物科提供的昆明种小鼠50只，体重18～20 g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。刺五加药材由延边成大药品有限公司提供。取0.5 kg刺五加，先用水浸泡1 h后加1.5 kg的水，每次煮沸1 h，共提取3次，把提取液合并浓缩至500 ml,然后加水配制成25％（250 g/L）和50％(500 g/L)的刺五加溶液。三氯化铝为分析纯，由北京化工厂生产；脑复康片由山东罗欣药业股份有限公司生产；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乙酰胆碱酯酶（TChE）试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测试盒均由南京建成生物工程有限公司购买。
1.2 仪器与设备。
水迷宫实验记录3 min内小鼠到达终点前的错误次数。小鼠跳台仪，移液器，组织匀浆机，722分光光度计，离心机，分析天平等均由本院基础部预防医学实验中心提供。
1.3 小鼠模型建立。
①对照组：按小鼠每10 g体重0.1 ml的标准每日上午灌胃给予0.85％生理盐水，5 d后开始下午隔日腹腔注射等体积的生理盐水；②模型组：每日上午灌胃给予0.85％生理盐水，5 d后开始下午隔日腹腔注射三氯化铝100 mg/kg；③刺五加25％组（刺1组）：每日上午灌胃给予25％刺五加液，5 d后开始下午隔日腹腔注射三氯化铝；④刺五加50％组（刺2组）：每日上午灌胃给予50％刺五加液，5 d后开始下午隔日腹腔注射三氯化铝；⑤脑复康组：每日上午灌胃给予脑复康230 mg/kg，5 d后开始下午隔日注射三氯化铝。各组连续腹腔注射20次，实验时间共为50 d。每天观察动物一般症状，包括行为状态、体征、饮水量、摄食等，每天记录一次体重。
1.4 记忆障碍测试。
跳台实验在小鼠染毒第15天进行训练，过24 h后重新测试，观察其跳台的潜伏期和3 min内跳台的错误次数。在长方形迷宫中注入温水，水温保持在30℃ 左右。测定前2 d训练小鼠，每日4次，共训练8次，让小鼠能沿着正确的路线游动到终点。染毒第20，23，26，29天分别测试其全程游泳时间、错误次数及无误率。
处死小鼠，立即取全脑，用冰冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称取组织重量，加9倍量的匀浆液，用匀浆器匀浆（操作要在冰水浴中进行），制成10%匀浆液，3 500 r/min离心10 min，取上清液，用考马斯亮蓝显色法测定脑组织蛋白含量。MDA含量测定：MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532 nm处有最大吸收峰，测吸光度值。SOD测定：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2），后者氧化胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。 TChE测定：乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱与巯基显色剂反应生成TNB（对三硝基苯）黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力。
1.6 统计学处理。
计量资料以x±s表示，采用SPSS11.0统计软件，进行多个样本均数的单因素方差分析和χ2检验。