中药对广州地区流感嗜血杆菌抑菌作用研究
作者：叶惠芬，刘平，陈惠玲，李尚文。
【关键词】 ,中草药。
［摘要］ 目的：探讨中草药对广州地区流感嗜血杆菌的体外抑菌作用。方法：采用琼脂稀释法检测流感嗜血杆菌对中药的最低抑菌浓度。结果：6种中草药水煎剂均有不同程度的抑菌作用，其中黄连抑菌效果最好，黄连水煎剂对流感嗜血杆菌MIC50为1 g/L，MIC90为2 g/L。结论:中药对流感嗜血杆菌有不同程度抑菌作用。
Experimental Research on Antibacterial Effect of Chinese Herbal Medicines on Haemophilus Influenzae in Guangzhou。
Abstract:Objective To explore the antibacterial effect of Chinese herbal medicines on Haemophflus influenzae in Guangzhou．Methods Minimal inhibitory concentratiOn(MIC) of the extracts affecting on bacteria was assayed by agar dilution．Results Six kinds of herbs decoction had different antibacterial effects on Haemophilus influenzae，among which Coptis washighly active against Haemophilus influenzae.Its MIC50 was 1 g/L.Conlusion Some chinses herbs had bacterionstatic effect against Haemophilus.
Key words:Chinses herbs;Bacteriostasis;Haemophilus influenzae。
流感嗜血杆菌是引起社区获得性肺炎最常见致病菌之一，近年来在临床检出率不断增多；流感嗜血杆菌在发展中国家小儿急性下呼吸道感染中分离率高达45％。世界各国发现流感嗜血杆菌耐药菌株特别是β内酰胺酶阳性的耐氨苄西林菌株的报道日益增多［1，2］，给临床治疗带来极大的困难。由于耐药菌株的大量出现可导致临床治疗失败，感染复发，住院时间延长，增加患者的经济负担和生理压力。中药具有清热解毒、滋补、抗菌等作用，且具有副作用小、抗耐药性好等特点，开始得到人们的广泛关注。为此，本课题进行了中药对本地区临床分离的流感嗜血杆菌体外抑菌效果的研究，为临床预防感染、临床治疗用药提供依据。
1 材料与方法。
1.1 菌株来源 2004年7月至2004年12月广州地区5家医院(广州市第一人民医院、广州市儿童医院、中山大学附属第二医院、广州医学院附属第一、第二医院)从临床分离的156株流感嗜血杆菌，按常规鉴定方法［3］：将痰及咽拭子标本按常规方法接种在血琼脂和巧克力平板上，35 ℃ 5％CO2环境下培养过夜，挑选2个~4个可疑菌落至血平板及胰大豆平板上作卫星试验。并在另一胰大豆平板上贴X+V因子、X因子、V因子纸片，各纸片相距5 cm。只在血平皿上卫星试验阳性、在胰大豆平板上卫星试验阴性，以及只在X+V因子纸片周围生长、X因子、V因子纸片周围不生长的菌落可判定为流感嗜血杆菌。
1.2 中草药 黄连、黄柏、黄芩、连翘、千里光和金银花共6种中药，均由我院购自广州市药材公司。
1.3 抗生素纸片 氨苄西林、红霉素、复方甲基异 唑、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林／克拉维酸、头孢呋新和头孢噻肟均为英国OXOID公司产品。
1.4 培养基 HTM药敏培养基和添加剂为英国OXOID公司产品。
1.5 中药煎制 参照陈奇的方法［4］进行，将100 g中药于砂锅，加200 ml蒸馏水浸泡30 min后用慢火煎至水量浓缩为100 ml过滤，药渣再加水200 ml煎煮、过滤，将2次滤液共200 ml煎煮浓缩成100 ml，使中药浓度为1 g／ml。经高压蒸汽灭菌后备用。中药的最低抑菌浓度(MIC)的测定：按NCCLS推荐的琼脂稀释法测定实验菌株的MIC值，用流感嗜血杆菌ATCC49619作参考质控菌株。
制备中药琼脂平板，中药和HTM药敏培养基琼脂按比例混合，最终含药浓度为250．0 g／L、125．0 g／L、62．5 g／L、31．25 g／L、15．62 g／L、7．81 g／L、3．90 g／L、1．95 g／L、0．98 g／L。
制备菌液，菌液调整为0．5麦氏单位后再作1∶10稀释，用1 μl定量接种环点种于琼脂表面，最终琼脂上所含接种菌量为104 cfu／ml。
采用多点接种法，首先点种生长对照平板(不含中药)，随后从最低浓度开始，依次点种不同浓度的中药平板，放35 ℃孵育24 h，记录无菌生长的最低中药浓度。
1.6 抗生素敏感试验 采用KB法进行，操作和结果判断严格按照NCCLS制定的最新规则及标准进行;用标准菌株ATCC49247作为质量控制。
1.7 数据统计分析 用WHO提供的WHONET5．3软件统计，分析MIC50及MIC90的中药浓度和抗生素的敏感试验。
2 结果。
2.1 抗生素的敏感试验 156株流感嗜血杆菌中β内酰胺酶阳性的占25％，除头孢噻肟外，对抗生素均出现不同程度的耐药，其中对复方甲基异 唑耐药率最高，达53．4％，其次为环丙沙星、氨苄西林、氯霉素，详见表1。
2.2 抑菌作用 6种中药对156株小儿流感嗜血杆菌均有不同程度的抑菌作用，其中黄连抑菌效果最好，黄连水煎剂对流感嗜血杆菌MIC50为1 g/L，MIC90为2 g/L;黄芩、黄柏、金银花和千里光水煎剂对流感嗜血杆菌MIC50分别为2 g/L、4 g/L、4 g/L、2 g/L、2 g/L，MIG90分别为4 g/L、16 g/L、16 g/L、8 g/L、8 g/L。