大鼠脑缺血模型 2—甲氧基雌二醇对全脑缺血大鼠HIF—1α及RTP801的作用研究
[摘要] 目 探讨甲氧基雌二醇（）对全脑缺血鼠α及凋亡相关基因R80作用。
方法 将成年雄性鼠0只随机分对照组（8）、全脑缺血组（8）和全脑缺血甲氧基雌二醇干预组（8）两组按再灌不各分6亚组。
采用改良ll V方法行全脑缺血鼠模型制作。
l染色进行海马神元计数免疫组化及RR技术进行α及R80 R表达检测。
结 全脑缺血干预组与全脑缺血组相应亚组相比神细胞计数明显增加α表达减少R80 R表达减低（＜005）。
结论 全脑缺血急性期抑制α及凋亡相关基因R80表达具有定神保护作用。
[图分类] R733 [献标识码] B [编] 673970（0）000603。
xbl r α rl g R80 llg glbl rbrl r。
G g ZG gr G L L 3。
r rlg, r l l vr lg, Lg 7003, ;r rrgr, r l l vr lg, Lg 7003, ; 3r rg, rl l l g vr, 5003,。
[br] bv vg xbl r α rl g R80 llg glbl rbrl r r r l l rgl r r rl v 3 gr gr (8), glbl rbrl gr (8) glbl rbrl + r gr (8), r G gr G + gr r r r r vl l (V)glbl r l r l g rr qv l ll br r g RR rv r rb v ll α r xr R80 R Rl br ll r G + gr gl gr r G gr (＜005) gl r lvl α (＜005) xr rl g R80 r gl(＜005) l br rv glbl rbrl r b lv xbl r α, b lv rl g R80。
[K r] R80; Glbl rbrl ; xbl r ; xrl。
缺氧诱导因子（x bl r）是能低氧状态下被激活核录因子国外已有许多研究表明轻脑缺血缺氧诱导因子表达增加具有保护作用但是有研究表明严重缺血缺氧量表达表现损伤性作用[]。
全脑缺血可发生心跳骤停、休克、颅脑外伤、外科手术低压等情况。
目前全脑缺血缺氧程关缺氧诱导因子神细胞凋亡作用及机制尚不明确国外相关报道较少。
实验应用抑制剂甲氧基雌二醇（xrl）作用全脑缺血鼠模型探讨对全脑缺血鼠α及凋亡相关基因R80作用。
材与方法。
动物及分组。
健康雄性成年rgl鼠0只体重（30±）g（购上海实验动物心）随机分假手术组（）、全脑缺血组（G）及全脑缺血甲氧基雌二醇干预组（G+）3组其全脑缺血组及全脑缺血甲氧基雌二醇干预组按再灌不分6 、 、 、8 、7 、7 6亚组假手术组和各亚组8只鼠。
模型制作及组织获取。
全脑缺血鼠模型制作采用改良ll 血管闭塞法[3]。
应用水合氯醛腹腔射麻醉鼠手术电凝鼠椎动脉 样方法麻醉将鼠双侧颈总动脉夹闭0 将鼠脑缺血前以及取下夹闭颈总动脉动脉夹脑电图作记录。
实验设计不将鼠心灌固定取脑组织行l染色及免疫组化染色。
用行RR检测鼠麻醉迅速断头取脑分离出双侧海马放置80℃低温冰箱保存。
全原貌 安装浏览器用户请先下安装 原版全。
全脑缺血甲氧基雌二醇干预组鼠甲氧基雌二醇腹腔射应用松开双侧颈总动脉夹（用量6 gkg）6 、 及 亚组鼠应用甲氧基雌二醇次8 组天应用次样剂量7 、7 组3天和7天分别各应用次样剂量。
l染色。
将冰冻切片室温放置30 放入 ℃丙酮固定0 ；置50～60 ℃温箱、%甲苯胺蓝水溶液0 ；蒸馏水洗涤；95%乙醇分化；脱水及透明封片。
应用免疫组织化学法检测α蛋白表达B显色具体操作步骤按照试剂说明。
α多克隆抗由武汉博士德公司提供。
应用B代替抗做阴性对照。
采用逆录多聚酶链反应（RR）法检测。
rzl提取R、反录及R实际步骤依照试剂盒说明。
R80引物及β由vrg公司（美国）提供合成试剂盒、rzl试剂盒和R扩增试剂盒由生工生物工程（上海）有限公司供应。
7 统计学处理。
高倍镜下每张切片海马区随机选择5视野进行神元密（神元数高倍镜视野）及α阳性细胞计数数据以（χ±）形式表示数据采用 30软件包进行统计分析全脑缺血组及全脑缺血甲氧基雌二醇干预组各亚组与假手术组比较采用方差分析全脑缺血组及全脑缺血甲氧基雌二醇干预组相应比较采用检验＜005差异有统计学义。
结。
全脑缺血鼠模型制作。
夹闭鼠双侧颈总动脉～3 脑电图显示直线表明模型制作成功。
夹闭鼠双侧颈总动脉0 将双侧动脉夹取下可见鼠脑电波有部分程恢复但脑电图频率以及波幅低颈总动脉夹闭前。
l染色以及神元计数。
假手术组鼠海马区3～5层神元形态清晰、数目多染色比较匀。
G组鼠海马区细胞数减少并且可见神细胞肿胀、变形、溶并形成空泡。
G+组8 、7 、7 亚组与G组相应亚组对比海马区细胞计数增加差异有统计学义（分别59、58、886＜005）细胞损伤减轻形态较规则边缘较清晰轴突形态较。
染色神元细胞数见表（高倍视野×00）。
镜下以棕黄色细颗粒α蛋白阳性信。
假手术组蛋白阳性信极其少见。
而G组蛋白阳性信缺血6 逐渐增加缺血7 达高水平7 基到达正常。
G+组8 、7 、7 亚组鼠海马区α较G组相应亚组蛋白阳性信低差异有统计学义（分别5、607、00＜005）。
R80 R假手术组鼠见表达而缺血6 可见G组鼠R80 R表达增加先随着延长而升高随着延长而降低7下降至正常水平。
G+组 、 、8 、7 亚组较G组相应亚组R80 R表达减少差异有统计学义（分别59、707、79、7＜005）。
R80吸光比值见表3。
3 讨论。
甲氧基雌二醇是雌激素正常代谢产物存人体血液与尿液可录水平抑制α[]。
是由α、β两亚基形成异二聚体核录因子能够被低氧状态所激活[5]。
参与调控下游系列靶基因表达目前发现由直接启动基因有60余其包括些依赖凋亡相关基因[56]以及对缺氧适应性基因脑缺血程α相关促凋亡基因主要有53、bl族某些成员（如其blX、bx等）、（ 3、 8、 9）、R80、G等。
我们实验结表明可抑制α表达从而抑制靶基因表达具有神保护作用[6]。
l R等[7]研究发现将α基因敲除α脑缺血缺氧鼠表达缺失凋亡相关基因表达减少表明α表达缺失脑缺血程具有定神保护作用从而推测α表达脑缺血缺氧是有害。
R80是 等[8]首次发现脑缺血动物模型及细胞培养发现其表达明显上调脑动脉闭塞鼠模型缺血半暗带以及坏死区应用原位杂交技术检测到R80脑缺血缺氧程R80表达升高见05～0 持续至少3 R80对缺氧反应动态变化与已知其他如VG等靶基因类似这提示了R80可能也是依赖基因。
实验显示正常细胞缺氧条件下R80 R表达可被强烈诱导而α 细胞样缺氧条件下却没有检测到其表达因推测α调控缺氧条件下R80表达。
7和细胞导入四环素选择启动子可促进R80表达葡萄糖缺乏培养基、低氧条件下以及诱导凋亡可见细胞被保护但是不再分裂细胞R80表达增加具有细胞毒性其可增加细胞对缺氧和氧化敏感性。
因R80表达所产生生物学效应取多种因素包括细胞类型和状态不状态下不类型细胞R80具有损伤或保护作用。
实验显示脑缺血缺氧6 组鼠可见R80表达表达至高峰见 组鼠表达逐渐减少7 组表达降至正常水平可见R80 R表达全脑脑缺血缺氧急性期。
甲氧基雌二醇治疗组可见神元计数增加α蛋白减少R80表达减少从而证明了R80是依赖这结与 等[8]结也是致。
因我们推测全脑缺血急性期抑制α及凋亡相关基因R80表达具有定神保护作用。
[参考献]。
[] Kz Kb Kr R x xbl r l g xr brvlv rr ll [] r r r l r00 5（）7078 全原貌 安装浏览器用户请先下安装 原版全。
[] Grr v r ll rl x bl r （） x [] l l0057（0）0090。
[3] lll Brrl B l blrl r z r[] rk9790（3）677。
[] LLk Gll L l Ⅰ ll rl rl xrl gg g l r[] r Bl r0065（）7。
[5] r R l α r r r?[] B rl006（56）88989。
[6] 彭静华李云袁晓东等 对全脑缺血鼠α影响[] 山东医药0077（）90。
[7] l R l R l Br kk xbl r l r rr r x g[] r0055（6）09907。
[8] r l vl xbl r rv gR80vlv [] l ll Bl00（7）8393。