超声介导微泡造影剂对人脐静脉血管内皮细胞膜作用的研究

作者：刘玉凤 任卫东 唐力 陈昕 马春艳 刘跃华。

【摘要】 目的 探讨超声介导微泡造影剂(MBCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)膜的作用。方法 向两皿HUVEC中加入MBCA(商品名：SonoVue)，用超声辐照，辐照后立即取一皿细胞送电镜室进行SEMS观察。另一皿细胞继续培养24 h后进行SEMS观察。结果 超声介导SonoVue可使HUVEC细胞膜的形态和结构发生明显异常改变。约23%细胞的细胞膜可见大小不等、数量不一的小孔。细胞继续培养24 h后再进行SEMS观察，发现细胞膜的形态未见小孔样结构改变。结论 超声介导SonoVue可使HUVEC细胞膜产生可逆性的小孔。

【关键词】 超声；人脐静脉血管内皮细胞；微泡造影剂；小孔。

【Abstract】 Objective To research the effect of ultrasoundmediated microbubbles contrast agent (MBCA)SonoVue on Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods HUVECs were all treated with SonoVue. After ultrasound irradiation, one dish of HUVECs were observed by electron microscope, the others were observed after being cultured for 24 hours. Results Ultrasoundmediated SonoVue caused obviously abnormal alteration on the shape and structure of HUVEC membrane. Pores of different diameters and quantity appeared in the membrane of about 23% cell. After being cultured for another 24 hours, pore structure of the cells disappeared. Conclusions Ultrasoundmediated SonoVue causes reversible pores in HUVEC membrane. 　　【Key words】 Ultrasound; HUVEC; MBCA; Pore目前超声介导微泡造影剂（microbubbles contrast agont,MBCA）在基因治疗方面的潜在应用价值备受关注。基因治疗时，基因物质必须到达靶细胞，通过细胞膜，进入细胞核，然后再经过转录、翻译为蛋白质，才能起到治疗作用〔1〕。本研究旨在观察超声介导MBCA对人脐静脉血管内皮细胞（HVVEC）膜的作用。

1 材料与方法。

1.1 材料及试剂 HUVEC（南京凯基生物科技开发有限公司）。试剂：胎牛血清（FBS）（Gibco公司，美国），1640培养液，胰酶蛋白消化液，青霉素，链霉素，MBCA（商品名：SonoVue，Bracco公司，意大利）， 0.9%生理盐水。实验器材：单孔聚苯乙烯培养皿（Coring公司，美国），25 ml一次性培养瓶，培养箱，倒置显微镜（IMS），显微镜，计数板，超声探头（Philips ie33 S51，频率1～5 mHz，heart：pen档），温度仪，水浴箱，扫描电镜（SEMS）。

1.2 实验方法。

1.2.1 细胞培养 含10%FBS的1640细胞培养液培养HUVEC，每1～2 d换液1次，每3～4 d传代1次。

1.2.2 SonoVue的配制 5 ml注射用生理盐水（0.9%NaCl）加入SonoVue药瓶中（每瓶含SF6 59 mg，冻干粉25 mg），剧烈震荡20 s至瓶内药物混合均匀后备用（此时SonoVue 浓度为17 mg/ml）。　　　　1.2.3 实验分组 A组：正常对照组；B组：单纯超声辐照组；C组：SonoVue组，以上各组均为一皿；D组：SonoVue+超声辐照组，两皿。用含10%FBS的1640培养液配成HUVEC悬液，计细胞数将浓度调至1×106/ml，将1 ml细胞悬液接种到直径35 mm单孔聚乙烯培养皿中。C组、D组各加浓度为17 mg/ml的SonoVue，每孔加300 μl。B组、D组用超声辐照，辐照后立即各组取一皿送电镜室进行SEMS观察。D组的另一皿细胞继续培养24 h后进行SEMS观察。