当归提取物的鉴定及镇痛活性观察

【摘要】 目的 鉴定当归提取物的主要化学成分，并观察其镇痛作用。方法 采用Molish反应和Fehling实验反应对当归提取物进行鉴定，苯酚硫酸法测定其糖含量;采用小鼠扭体法和热板法观察当归提取物的镇痛作用。结果 当归提取物的主要成分为多糖，其糖含量为81.4%，此提取物可明显抑制醋酸所致小鼠扭体反应，提高小鼠痛觉反应的痛阈。结论 此当归提取物主要成分为多糖，具有明显的镇痛作用。

【关键词】 当归提取物;鉴定;多糖;镇痛作用。

ABSTRACT ：Objective To identify and analyze the main composition of Angelica Sinensis extract and to investigate its analgesic effect.Methods The identification test was processed with Molish test and Fehling test, the polysaccharide content analysis was processed by phenolsulfuric acid reaction. The analgesic effect was investigated by acetic acid—induced wringing test and hotplate procedure in mice.Results The main composition of Angelica Sinensis extract was polysaccharide, the polysaccharide content of Angelica Sinensis extract was 81.37%. The frequency of wringing reaction induced by acetic acid was obviously decreased, and the pain threshold of mice in the hotplate procedure was increased after the animals were administered with Angelica Sinensis extract.Conclusion The result indicates that the main composition of Angelica Sinensis extract is polysaccharide, and it possesses significant analgesic effect.

KEY WORDS：Angelica Sinensis extract; Identification; Polysaccharide; Analgesic effect。

当归Angelica Sinensis (Oliv.) Diels是祖国医学中最常用的中药材之一，可用于活血通经、虚寒腹痛，亦可治跌打损伤。当归在历代方剂中应用频度极高，已被证明具有复杂的生物活性[1~3]。我们从当归中提取到一种组分，对其主要成分进行了初步鉴定，并观察了其镇痛作用。

1 材料和方法。

1.1 仪器与药品。

Savant ecs100UVS400A 冷冻真空干燥机;RB200智能热板仪，成都泰盟科技有限公司。葡萄糖对照品，Amresco。阿司匹林片，昆明制药厂，临用前取研碎后配制成12g/L的浓度。

1.2 实验动物。

昆明小鼠50只，雌性，体质量20±2g，购于湖北省医学科学院。

1.3 当归提取物的制备。

当归100g，切片，乙醇回流后100℃沸水提取，提取液60℃减压浓缩至60ml，加入95%乙醇3200ml，充分搅拌，—20℃静止48h后取上清，用乙酸乙酯萃取，收集水相，上大孔树脂柱，分别用甲醇、乙醇、水过柱，收集水洗脱组分，60℃减压浓缩后加入适量丙酮，4000rpm离心10min，收集沉淀，用水溶解后挥去溶剂，活性炭过滤，滤液—80℃冰箱预冻2天后于冷冻干燥机冷冻至干燥。

1.4 试剂制备。

(1)Fehling试剂：6.25g CuSO4加水定容至100.0ml，普通滤纸过滤;34.9g酒石酸钾钠与10.0gNaOH加水定容至100.0ml，普通滤纸过滤。临用前两滤液等体积混合。

(2)5%苯酚试剂：取苯酚100.0g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，蒸馏，收集182℃馏分，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内冷藏备用。

(3)当归溶液：取冻干的当归提取物，分别配成9.0g/L、18.0g/L、36.0g/L的溶液，115℃灭菌30min后备用。

1.5 当归提取物的鉴定。

(1)Molish反应：取当归提取物10.0mg，加水1.0ml溶解，加2滴15%α萘酚乙醇溶液，混合摇匀后，沿管壁缓缓加入硫酸0.50ml，将试管静置10min后50℃水浴5min，，观察在两液面交界处有无紫红色环出现。

(2)Fehling实验：取当归提取物10.0mg，加水定容至200ml，取4.0ml置试管中，加5%盐酸液1.0ml，沸水水浴15min，室温静止至冷，加酚酞指示剂1滴，用10%NaOH试液中和至中性，加Fehling试剂4～5滴，50℃水浴5min，观察是否生成棕红色沉淀。

1.6 多糖含量测定。

按照文献方法[4]，精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品120mg，加水定容到100ml，得1.2mg/ml葡萄糖贮备液，分别精密吸取葡萄糖贮备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，定容至100ml，摇匀，分别吸取上述标准葡萄糖溶液1.0ml, 加入10ml试管中, 加入5%苯酚溶液1.0ml，旋涡混匀, 迅速滴加浓硫酸5ml，旋涡混匀，60℃水浴加热20min，室温冷却，另取1ml蒸馏水作空白对照，在490nm波长处测定吸光值。

精密吸取当归提取物6.0mg，用蒸馏水溶解定容至100ml，取该溶液100μl加入900μl蒸馏水使样品液为1ml，加5%苯酚溶液1.0ml，旋涡振荡，迅速加浓硫酸5.0ml，旋涡振荡，60℃水浴20min，取出冷却至室温，于490nm处测定吸光度值。代入标准曲线求出当归提取物中总糖含量。

1.7 当归提取物的镇痛作用。

(1)当归提取物对醋酸致小鼠扭体的影响。小鼠随机分成5组，空白组，阳性对照组，低剂量当归提取物组及中、高剂量组，每组10只。低、中、高剂量当归提取物组分别腹腔注射9g/L、18g/L、36g/L的当归提取物溶液0.5ml，阳性对照组按照300mg/kg给予阿斯匹林灌胃，空白组给予等量NS腹腔注射，给药1h后，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml，记录15min内小鼠扭体反应次数。

(2)当归提取物对小鼠痛阈的影响。以热板测痛仪测定动物在(55.0±0.5)℃的基础痛阈，低于10s或高于30s以及入仪器跳跃的小鼠剔除不用，记录动物放至热板上至动物出现舔足反应的时间记为基础痛阈。各组小鼠给药1h后测定动物痛阈，若动物60s内未出现舔足反应，痛阈记为60s。