血必净对大鼠外伤性脑损伤后血清S100B和IL6水平的影响
作者：袁雪松, 卞晓星, 戚传平。
【摘要】 目的： 探讨血必净对大鼠外伤性脑损伤的神经保护机制。方法： 将40只健康成年雄性SD大鼠随机分成4组：正常对照组、血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组。采用改进的Feeney氏法制作大鼠自由落体脑创伤模型。伤后第6小时、第24小时、第3天、第5天、第7天断尾采血，运用双抗体夹心ELISA方法检测各组治疗后血清中S100B蛋白和白细胞介素6（interleukin6，IL6）的含量。结果： 与正常对照组相比，血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组血清中S100B蛋白和IL6的含量均显著升高（P0.001）；与生理盐水组相比，血必净治疗组和胞二磷胆碱治疗组血清中S100B蛋白和IL6的含量显著降低（P0.001）；与胞二磷胆碱治疗组相比，血必净治疗组血清中S100B蛋白和IL6的含量显著降低（P0.05）。结论： 血必净可能通过抑制脑外伤后S100B和IL6的合成与分泌，降低全身和局部的炎症反应程度，从而发挥神经保护作用。
【关键词】 血必净；大鼠; 外伤性脑损伤；S100B；白细胞介素6。
［Abstract］ Objective: To explore the neuroprotective mechanisms of Xuebijing on rats after traumatic brain injury. Methods： Forty healthy adult male SpragueDawley rats were randomly devided into 4 groups: normal control, Xuebijing, nicholin and saline groups. The model was made by improved Feeney′s traumatic brain injury model. Serum samples were collected at 6h, 24h, 3d, 5d, 7d after trauma. The serum S100B protein and IL6 content of each group after treatment was detected with double antibody Sandwich ELISA. Results： Compared with the normal control group, the serum S100B protein and IL6 content significant difference in Xuebijing, nicholin and saline groups(P0.001); compared with the saline group, the serum S100B protein and IL6 content significantly lower in Xuebijing and nicholin groups(P0.001); compared with the nicholin group, the serum S100B protein and IL6 content significantly lower in Xuebijing group(P0.05). Conclusion： Inhibition of the composition and secretion of S100B protein and IL6 by Xuebijing might be one of the mechanisms in decreasing inflammatory reaction systemic and local， and this may be how Xuebijing exerts its neuroprotective effect on traumatic brain injury.
［Key words］ Xuebijing; rats; traumatic brain injury; S100B; interleukin6。
外伤性脑损伤除了原发伤外，更为重要的是以局部炎症反应为主的继发性脑损害。机械力的损伤导致炎性细胞因子如S100B蛋白和IL6的大量产生。血必净为中药制剂，主要拮抗内毒素和炎症介质。以往的研究多集中于拮抗内毒素反应方面［1,2］，关于拮抗炎症介质的研究较少。尤其在脑外伤方面更少，所查文献中尚未见到血必净与炎性细胞因子S100B蛋白和IL6相互作用方面的报道。本研究运用双抗体夹心ELISA方法对运用血必净治疗的外伤性脑损伤大鼠血清S100B蛋白和IL6的含量进行连续性检测，旨在探讨血必净对大鼠外伤性脑损伤炎症反应的保护机制。
1 材料与方法。
1.1 材 料。
血必净由天津红日药业股份有限公司提供，大鼠S100B蛋白和IL6 ELISA试剂盒购自英基生物科技有限公司(美国生产)。
1.2 实验动物及分组。
健康成年雄性SD大鼠40只，体质量（300±20）g,由江苏大学实验动物中心提供。随机分为正常对照组、血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组。正常对照组4只，其余每组12只。血必净治疗组于脑外伤后立即腹腔注射血必净(4 ml/kg)，此后每12小时1次，共注射10次。生理盐水组和胞二磷胆碱治疗组于伤后立即经腹腔分别注射生理盐水和胞二磷胆碱，胞二磷胆碱剂量为100 mg/kg。各组注射容量相同，生理盐水组和胞二磷胆碱治疗组每24小时注射1次，共注射6次。
1.3 动物模型的建立。
采用改进的Feeney氏法［3］制作自由落体脑挫伤模型。0.35%戊巴比妥钠溶液30 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,俯卧位固定头部,矢状切开头皮,显露左顶骨,运用牙科钻在冠状缝前1 mm,中线旁左1 mm钻一小孔,扩大骨窗成3 mm×3 mm,显露完整硬膜。打击器下端直径2.0 mm,下陷深度控制为2.0 mm,运用砝码自由落体打击器打击硬膜，造成左侧大脑额叶脑挫伤。砝码自由下落所形成的冲击能量为20×50 g·cm。打击完毕后,缝合头皮。
1.4 标本的采集及检测。
各组大鼠均在伤后第6小时、第24小时、第3天、第5天、第7天断尾采血，每次采血约1 ml。常温下3 500 r/min离心15 min后取上清液，—20℃冻存。分别使用大鼠S100B蛋白定量双抗体夹心ELISA试剂盒和大鼠IL6蛋白定量双抗体夹心ELISA试剂盒检测血清中S100B蛋白和IL6的浓度。
1.5 统计学分析。
采用SPSS10.0统计分析软件，数据以±s表示，运用方差分析进行组间比较，以P0.05为有统计学意义。
2 结 果。
与正常对照组相比，血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组血清中S100B蛋白含量均显著升高（P0.001）；与生理盐水组相比，血必净治疗组和胞二磷胆碱治疗组血清中S100B蛋白的含量显著降低（P0.001）。生理盐水组血清S100B蛋白浓度在伤后立即升高，并在第24小时达到高峰，此后缓慢下降，并保持较高水平。胞二磷胆碱治疗组中血清S100B蛋白浓度在伤后升高缓慢，第3天达到高峰，随后快速下降，短时间内降至较低水平。而血必净治疗组中血清S100B蛋白浓度升高缓慢，升幅很小，高峰出现在第3天，随后即下降至较低水平，与胞二磷胆碱治疗组相比，P0.05。各组血清S100B蛋白含量的变化见表1。
与正常对照组相比，生理盐水组血清IL6含量在伤后立即升高，并在第3天达到高峰，此后缓慢下降，并保持较高水平（P0.001）。与生理盐水组相比，各组均有显著差别（P0.001）。胞二磷胆碱治疗组血清IL6含量在伤后升高极为缓慢，峰值在第5天,随后逐渐下降。血必净治疗组中血清IL6含量在伤后升高迅速，升幅较大，高峰出现较早，在第24小时达到峰值，但峰值明显低于其他两组，且随后的下降幅度亦较其他两组大，与胞二磷胆碱治疗组相比，P0.01。各组血清IL6含量的变化见表2。表1 各组大鼠血清S100B蛋白浓度的变化 表2 各组大鼠血清IL6浓度的变化±s， pg/ml。