参芪利水汤治疗大鼠卵巢过度刺激综合征模型的实验研究
【摘要】 目的观察自拟方剂参芪利水汤治疗大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型的疗效，为临床上进一步治疗OHSS提供实验学基础。方法选择未成年雌性Wistar大鼠20只，皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)制成OHSS模型，随机分为实验组、对照组两组，实验组采用参芪利水汤灌胃，对照组为空白对照。 1周后用ELISA法检测两组血中雌二醇（E2）和孕酮(P)的含量，测定腹腔EB含量。结果实验组腹腔ＥＢ含量、血清中E2含量与对照组比较在统计学上均有显著性差异（P＜0.05）。结论自拟中药参芪利水汤治疗大鼠OHSS可明显降低腹腔血管通透性和血清中E2含量。
【关键词】 卵巢过度刺激综合征； 中药； 雌二醇； 孕酮。
Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of the traditional Chinese medicine Shenqilishui Decoction in treating ovarian hyperstimulation syndrome in rats.Methods20 rats were divided into two groups randomly, and the OHSS model was induced by subcutaneous injection of PMSG and HCG, difference methods was adopted to treat them. Using ELISA method to detect the level of E2 in blood.ResultsThe traditional Chinese medicine Shenqilishui Decoction has protective effect on OHSS.ConclusionThis method shows good effect in treating OHSS.
Key words：OHSS; Chinese medicine; E2; P。
近年来，随着生殖内分泌学的迅速发展,促排卵药物克罗米酚(CC)、人绝经期促性腺激素(HMG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体生成激素释放激素(LHRH)等广泛用于治疗不孕症，卵巢过度刺激综合征(OHSS) 已成为妇科临床医生关注并感到十分棘手的问题。西医一般处理包括卧床休息，有腹水或胸水者采取半卧位，进软食或半流质饮食，少食多餐，低盐饮食，纠正血容量异常，静脉输入低分子右旋糖酐，但效果欠佳。临床上我们利用此中药方剂取得了初步成效，为进一步观察其具体作用机理，设计本实验。本研究通过建立大鼠OHSS模型，自拟中药方剂治疗并观察其疗效，为临床进一步治疗奠定实验学基础。
1 材料与仪器。
1.1 实验动物与分组选用体质量45～50 g、鼠龄22日的未成年Wistar雌鼠（清洁级）20只，由河北医科大学实验动物中心提供，制成OHSS模型后随机分为实验组和对照组两组，每组各10只。 1.2 试剂与仪器一抗VEGF和IL—6兔抗IgG多克隆抗体。购于santa cruze 公司，SP9001试剂盒及DAB显色剂购于北京中山生物技术有限公司。LEICA RM2125石蜡切片机（莱卡上海分公司），Nikon尼康光镜显微照相机（日本株式会社尼康），Motic6.0数码医学图象分析系统（厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司）。
2 方法。
2.1 OHSS大鼠模型的建立按改良的Ujioka方法［1］在未成年鼠体内建立OHSS模型。每只大鼠从第22日龄起连续4 d皮下注射含有10 IU妊娠雌马血清促性腺激素(pregnancymareserumgo nadotropin,PMSG,天津实验动物中心)的生理盐水0.2 ml,第5天(最后1次注射PMSG后24 h)注射含有100 IU HCG(丽珠制药厂)的生理盐水0.2 ml。48 h后卵巢显著增大,表面紫褐色,有多个卵泡形成，出现腹水表明建立了大鼠OHSS模型。
2.2 中药方剂及治疗黄芪30 g，党参30 g，白术24 g，茯苓24 ｇ,当归15 g，川芎15 ｇ,丹参18 ｇ,海藻24 g，昆布30 g,牡蛎20 ｇ,内金24 g，阿胶9 ｇ,桑寄生30 g,菟丝子30 ｇ。经我院煎药室加工制成药液，每袋150 ml。在注射HCG前1 h始实验组每天采用中药灌胃2 ml，对照组为空白对照。共1周。
2.3 标本采集和贮存HCG注射7 d后即33日龄时，肌肉注射氯氨酮（0.1 mg/kg）麻醉大鼠，尾静脉注射1%的Evans Blue(EB,Sigma)0.1 ml。30 min后从大鼠眼眶采血1 ml入抗凝管，待血液凝固后，在离心机中以5 000 r/min离心10 min，吸取上清液置－２０℃箱贮存备检。脱颈处死大鼠。正中切开腹腔，观察有无腹水,然后按照Ujioka［2］和Khanna［3］的改良方法用5 ml生理盐水冲洗腹腔。将冲洗液收集到试管中,稀释至10 ml,加0.1 mol/L氢氧化钠0.05 ml过滤,并以3 000 r/min的速度在室温下离心10 min。然后用分光光度计(国产721型)在波长590 nm测定OD值。
2.4 观察指标。
2.4.1 腹腔毛细血管通透性根据标准浓度及其OD值绘制标准曲线,计算各组腹腔冲洗液EB的含量。
2.4.2 血中E2和P的含量的测定利用放射免疫方法，采用天津九鼎医学生物有限公司试剂盒，方法及操作程序均按有关说明进行。
2.5 卵巢过度刺激综合征诊断标准根据Golan［4］标准,卵巢体积增大、腹腔毛细血管的通透性增加和腹水均出现方可诊断为卵巢过度刺激综合征。
2.6 统计学处理统计方法所有计量资料采用±s表示,均数差异的显著性采用SPSS统计软件进行方差分析,P0.05表示在统计学上有显著性差异。
3 结果。
3.1 OHSS大鼠各组治疗后腹水EB含量实验组大鼠腹腔EB含量显著低于对照组，在统计学上有显著性差异（P0.05）。结果见表1。表1 OHSS大鼠治疗后各组腹水EB含量（略）。
3.2 治疗后大鼠外周血中E2、P的改变实验组大鼠外周血中E2含量显著低于对照组，在统计学上有显著性差异（P0.05）。大鼠实验组和对照组外周血中P含量在统计学上无显著性差异（P＞0.05）。结果见表2。表2 OHSS大鼠治疗后各组外周血E2、P的含量（略）。